Nima uchun moyli linzalarning kattalashishi oddiy ob'ektiv linzalardan kattaroq?
Mikrobiologik tajribalarda bo'yashdan oldin bakteriyalarni tuzatish kerak bo'lgan sabablar:
1: Hujayralarni o'ldiradi, bo'yoq bilan bo'yash oson.
2: Bakteriyalarni shisha slaydga yopishtirib qo'ying va uni suv bilan yuvish oson emas.
Fikslashda uni asta-sekin quritish kerak. Agar chindan ham tezlashmoqchi bo'lsangiz, spirtli chiroqning alangasi ustidagi masofada bir necha marta quritishingiz mumkin. Shisha slaydni qizib ketishiga yo'l qo'ymang, aks holda u bakteriyalarning hayot shaklini yo'q qilishi mumkin.
Gram bo'yash va bakteriyalarni mikroskopik kuzatish
1. Eksperimental tamoyil
Gram bo'yash printsipi: Bakteriyalar hujayra devorlarining tarkibi va tuzilishi tufayli Gram bo'yashga turlicha javob beradi. Gram-musbat bakteriyalarning hujayra devori asosan peptidoglikan tomonidan hosil qilingan tarmoq tugunidir. Etanol bilan ishlov berilganda, suvsizlanish tufayli tarmoq strukturasining gözenek hajmi kichikroq bo'ladi va o'tkazuvchanlik pasayadi, shuning uchun kristalli binafsha-yod kompleksi moddani tozalash va hujayrada ushlab turish oson emas, va ko'k- asosiy bo'yash vositasining binafsha rangi hali ham rangsizlantirish va qarshi bo'yashdan keyin saqlanib qoladi. Gram-manfiy bakteriyalar hujayra devorining peptidoglikan qatlami yupqa va lipid miqdori yuqori bo'ladi, shuning uchun dekolorizatsiya bilan ishlov berish amalga oshirilganda, lipid etanol (yoki aseton) bilan eritiladi va hujayra devorining o'tkazuvchanligi ortadi, shuning uchun kristalli binafsha-yod kompleksi Elutatsiya qilish osonroq va qarama-qarshi bo'yoq bilan bo'yalgandan so'ng, hujayralar qarama-qarshi dog'ning qizil rangi bilan bo'yalgan. Mikroskopni tasvirlash printsipi: Zamonaviy oddiy optik mikroskoplar tasvirni kattalashtirish uchun ko'zoynak va ob'ektiv linzalarning ikkita linzali tizimidan foydalanadi, shuning uchun ular ko'pincha aralash mikroskoplar deb ataladi. Mikroskopning optik tizimida ob'ektiv linzalarning ishlashi eng muhim hisoblanadi va moyli linzalarning kattalashishi mikrobiologik tadqiqotlar uchun eng muhimi bo'lgan eng katta hisoblanadi. Shisha slayd va linzalar orasiga immersion moy qo'shishning asosiy maqsadi yorug'likning yorqinligini oshirish va mikroskopning ruxsatini oshirishdir. Yorug'likning sinishi yoki to'liq aks etishini kamaytirish va kuzatilgan tasvirni aniqroq qilish uchun yorug'lik o'tkazuvchi vosita sifatida havo o'rniga moy ishlatiladi.
2. Eksperimental jihozlar
1. Koloniyalar:
Escherichia coli 24 soat ozuqaviy agar eğimli kultura,
Staphylococcus aureus taxminan 24 soatlik ozuqaviy agar qiya kulturasi, Bacillus subtilis 12-18h ozuqaviy agar eğimli kultura.
2. Eritmalar yoki reagentlar:
Distillangan suv, yod eritmasi, kristalli binafsha rang eritmasi, 95 foizli spirt, safranin bo'yash eritmasi, sadr yog'i. 3. Asbob:
Mikroskop, shisha slayd, emlash halqasi, spirtli chiroq, pinset, linza to'qimasi.
3. Eksperimental bosqichlar
a:
1. Smear
Slaydni chiqarib oling, slaydni yoqing, slayddagi spirtni yoqib yuboring va sterilizatsiya qiling, o'rtasiga bir tomchi distillangan suv qo'ying, emlash halqasidan foydalanib, sinovning qiya muhitida oz miqdordagi bakteriyalarni yumshoq qilib oling. kolba, Butun jarayon davomida probirkaning og'zi spirtli chiroq ustida bo'lishi kerak va madaniyat muhitining ifloslanishini oldini olish uchun tezlik tez bo'lishi kerak. Keyin shisha slayddagi mayda suv tomchilarini dumaloq harakatlar bilan surting, suv tomchilari bulutli bo'lganda to'xtating va ularning qurib, mahkamlanishini kuting.
2. Birlamchi bo'yash
Koloniyaga kristalli binafsha rang (bakteriya plyonkasini yopish o'rinli) to'kib tashlang, 1-2 daqiqa davomida bo'yab turing, bo'yash eritmasini to'kib tashlang va eluat rangsiz bo'lguncha slaydning yuqori qismidan nozik suv bilan yuving; va dog'ni slaydga qo'ying. Dilimlardagi suvni silkitib tashlang.
3. Mordant
Qolgan suvni yuvish uchun tomchilab yod eritmasini qo'shing, taxminan 1 daqiqa davomida yoping va suv bilan yuving.
4. Rangsizlanish
Shisha slayddagi suvni silkitib oling, shisha slaydni egib, oq fon ostida rangsizlantirish uchun 95 foizli spirt qo'shing, oqib chiqadigan spirt ko'k ko'rinmaguncha, darhol spirtni suv bilan yuving va shisha slaydni qo'ying. tilimdagi suvni o'chiring.
5. Qarama-qarshilik
Safranin eritmasi bilan qariyb 1-2 daqiqa davomida bo'yab turing, suv bilan yuving, so'ngra changni yutish qog'oz bilan quriting.
6. Mikroskopik tekshirish:
Kam kattalashtirish linzalari ostida kuzatilayotgan bakteriya koloniyasini qidiring (slaydni harakatlantirishda davom eting, agar siz qizil soyani sezsangiz, darhol to'xtating, kattalashtirishni sozlang, agar u koloniya bo'lmasa, topishda davom eting), linza bochkasini ko'taring, va keyin moy oynasiga o'ting. Namuna maydoniga bir tomchi sadr yog'i qo'shing va linza bochkasini qo'pol sozlagich bilan ehtiyotkorlik bilan tushiring, shunda moy linzalari moyga botiriladi va deyarli namunaga tegadi. Kondenserni eng yuqori holatga ko'taring va diafragmani to'liq oching, ob'ektiv tasviri ko'rish sohasida paydo bo'lguncha sekin ko'tarish uchun qo'pol sozlagichdan foydalaning va uni aniq va diqqat markazida qilish uchun nozik rostlagichdan foydalaning.
