Mikrob hujayralarining shaklini ko'rish uchun qanday mikroskop ishlatiladi
Yalang'och ko'z bilan kuzatish qiyin bo'lgan barcha mayda organizmlar uchun umumiy atama. Mikroorganizmlarga bakteriyalar, viruslar, zamburug'lar va bir nechta suv o'tlari kiradi. (Biroq, ba'zi mikroorganizmlar yalang'och ko'z bilan ko'rinadi, masalan, qo'ziqorinlarga tegishli qo'ziqorinlar, Ganoderma lucidum va boshqalar) Viruslar nuklein kislotalar va oqsillar kabi bir necha komponentlardan tashkil topgan "hujayra bo'lmagan organizmlar" turidir, lekin ularning omon qolish tirik hujayralarga bog'liq bo'lishi kerak. Mavjud bo'lgan turli muhitlarga ko'ra ularni prokaryotik mikroorganizmlar, kosmik mikroorganizmlar, qo'ziqorin mikroorganizmlari, xamirturush mikroorganizmlari, dengiz mikroorganizmlari va boshqalarga bo'lish mumkin.
Mikroorganizmlarning roli va zarari:
Mikroorganizmlarning odamlarga eng muhim ta'siridan biri yuqumli kasalliklarning tarqalishidir. Inson kasalliklarining 50 foizi viruslardan kelib chiqadi. Insonga kasallik keltirib chiqaradigan mikroblar tarixi insonning ular bilan doimiy kurashi tarixidir. Insoniyat kasalliklarning oldini olish va davolashda katta yutuqlarga erishdi, ammo yangi va qayta paydo bo'ladigan mikrobial infektsiyalar, masalan, samarali terapevtik dori vositalariga ega bo'lmagan ko'plab virusli kasalliklar paydo bo'lishda davom etmoqda. Ayrim kasalliklarning patogen mexanizmi aniq emas. Ko'p sonli keng spektrli antibiotiklarni suiiste'mol qilish kuchli seleksiya bosimini keltirib chiqardi, ko'plab shtammlarni mutatsiyaga olib keldi, dori qarshiligining paydo bo'lishiga olib keldi va inson salomatligiga yangi tahdidlar tahdid solmoqda. Ba'zi segmentlangan viruslar rekombinatsiya yoki reassortment orqali mutatsiyaga uchraydi. Eng tipik misol gripp virusi.
Mikroorganizmlarning o'ziga xos ta'rifini bilgandan so'ng, eksperimentator mikroorganizmlarni o'rganayotganda qanday turdagi mikroskopdan foydalanishi kerak va qanday mikroskop yordamida yaxshiroq ko'rish va umumiy mikrob shakllarini kuzatish va tahlil qilish mumkin.
Mikroskopning ixtirosi yalang'och ko'z bilan ko'rinmaydigan jilmaygan narsalarni ko'ra olishdir. Mikroorganizmlarning kattaligi juda kichik, shuning uchun ularni mikroskop yordamida kattalashtirish va kuzatish kerak. Bundan tashqari, mikroorganizmlarning ko'p turlari mavjud, shuning uchun asosan optik mikroskoplarning ko'pchiligi mumkin Mikroorganizmlarni kuzatish uchun keyingi savol mikroorganizmlarni kuzatish va tahlil qilish uchun qanday mikroskopdan foydalanish kerak. Mikrob morfologiyasini kuzatish uchun keng tarqalgan mikroskoplarga biologik mikroskoplar, fazali kontrastli mikroskoplar, teskari mikroskoplar, floresan mikroskoplar va konfokal mikroskoplar kiradi. Mikroskop va boshqalar.
Quyida mikroorganizmlarni kuzatish uchun ishlatiladigan turli mikroskoplar tasvirlangan:
1. Oddiy yorug'lik mikroskopi
Yorug'lik manbai sifatida tabiiy yorug'lik yoki yorug'lik ishlatiladi va uning to'lqin uzunligi taxminan {0}},4 mkm. Mikroskopning aniqlik qobiliyati to'lqin uzunligining yarmiga teng, ya'ni 0,2 mkm, oddiy ko'zga ko'rinadigan eng kichik tasvir esa 0,2 mm. Shuning uchun 1000 marta kattalashtirish uchun moyli (immersion) oynadan foydalanish 0,2 mkm zarrachalarni oddiy ko‘zga ko‘rinadigan 0,2 mm gacha kattalashtirishi mumkin. Oddiy optik mikroskoplardan bakteriyalar, aktinomitsetalar va zamburug'larni kuzatish uchun foydalanish mumkin.
2. Darkfield mikroskopiyasi odatda bo'yalmagan mikrob morfologiyasi va harakatini kuzatish uchun ishlatiladi. Oddiy mikroskopga qorong'u maydon kondensatori o'rnatilgandan so'ng, yorug'lik to'g'ridan-to'g'ri o'rtadan kira olmaydi va ko'rish maydoni qorong'i bo'ladi. Namuna kondensatorning chetidan qiyshiq yorug'lik olganida, u tarqalib ketishi mumkin, shuning uchun yorqin mikroorganizmlar bakteriyalar yoki spiroketalar kabi qorong'u maydon fonida kuzatilishi mumkin.
3. Fazali kontrastli mikroskop Fazali kontrastli mikroskop to'g'ridan-to'g'ri yorug'likning yorug'lik fazasini va amplitudasini o'zgartirish va yorug'lik fazasining farqini yorug'lik intensivligi farqiga aylantirish uchun fazalar farqi plastinkasining yorug'lik effektidan foydalanadi. Fazali kontrastli mikroskopda yorug'lik bo'yalmagan namunadan o'tganda yorug'lik fazasidagi farq namunaning turli qismlari zichligining bir-biriga mos kelmasligidan kelib chiqadi va mikroorganizmlarning morfologiyasi, ichki tuzilishi va harakat rejimini kuzatish mumkin.
4. Floresan mikroskop Floresan mikroskop asosan oddiy optik mikroskop bilan bir xil bo'lib, asosiy farq yorug'lik manbai, filtr va kondensatordir. Hozirgi vaqtda ularning ko'pchiligi epi-yorug'lik moslamalaridan foydalanadi va yuqori bosimli simob lampalari odatda ultrabinafsha yoki ko'k-binafsha nurlar chiqarishi mumkin bo'lgan yorug'lik manbalari sifatida ishlatiladi. Ikkita turdagi filtrlar mavjud: qo'zg'atuvchi filtr va assimilyatsiya filtri. Umumiy yorqin maydon kondensatorlariga qo'shimcha ravishda, qorong'u maydon kondensatorlari floresan va fon o'rtasidagi kontrastni kuchaytirish uchun ko'k nurdan foydalangan holda floresan mikroskoplarda ham qo'llanilishi mumkin. Ushbu usul floresan pigmentlar bilan bo'yalgan yoki floresan antikorlar bilan birlashtirilgan bakteriyalarni aniqlash yoki identifikatsiya qilish uchun qo'llaniladi.
5. Elektron mikroskoplar yorug'lik manbai sifatida elektron oqimidan foydalanadi. Ko'rinadigan yorug'lik bilan solishtirganda, to'lqin uzunligi o'n minglab marta farq qiladi, bu piksellar sonini sezilarli darajada yaxshilaydi. Magnit bobin optik kuchaytirish tizimi sifatida ishlatiladi va kattalashtirish o'n minglab yoki yuz minglab marta yetishi mumkin. Ko'pincha virus zarralarida qo'llaniladi. va bakterial ultrastrukturani kuzatish.
Bo'yalmagan mikrob namunalarini kuzatish:
Bo'yalmagan namunalar odatda bakterial morfologiya, quvvat va harakatni kuzatish uchun ishlatilishi mumkin. Bakteriyalar rangsiz va bo'yalmagan holda shaffof bo'lib, mikroskop ostida asosan bakteriyalarning sinishi ko'rsatkichi va atrof-muhit o'rtasidagi farq orqali kuzatiladi. Flagellali bakteriyalar kuchli harakat qiladi, flagellasiz bakteriyalar esa tartibsiz Broun harakatini ko'rsatadi. Treponema pallidum, Leptospira va Campylobacter kabi tirik bakteriyalar diagnostik ahamiyatga ega bo'lgan o'ziga xos shakl va harakat shakllariga ega. Tez-tez ishlatiladigan usullar bosimni tushirish usuli, marjonlarni tushirish usuli va kapillyar usuldir.
1. Osilib tushirish usuli Toza botiq shisha slaydning botiq teshigi atrofiga vazelin surting, emlash halqasi bilan bakterial suspenziya halqasini oling va uni qopqoq oynasining o'rtasiga qo'ying, so'ngra botiq shisha slaydning botiq teshigini tekislang. Qopqoq oynaning markazidagi tomchi va Qopqoqni qo'ying, so'ng uni tezda ag'daring, konkav teshik chetidagi vazelinga mahkam yopishishi uchun qopqoq slipini engil bosing va keyin yuqori quvvat ostida kuzating. mikroskop (yoki qorong'u maydon).
2. Bakterial suspenziyadan emlash halqasi bilan halqani oling va uni bosimni pasaytirish usuli bilan toza shisha slaydning o'rtasiga qo'ying va havo pufakchalari paydo bo'lishiga yo'l qo'ymaslik va bakterial suspenziyani qopqoq oynasi bilan yumshoq tarzda yoping. bakterial suspenziyaning to'lib ketishidan. Yuqori quvvatli ob'ektiv ostida yorqin maydon (yoki qorong'u maydon) kuzatuvi.
3. Kapillyar usul asosan anaerob bakteriyalar kinetikasini tekshirish uchun ishlatiladi. Odatda 60~70 mm uzunlikni tanlang. Anaerob bakteriyalar suspenziyasini 0,{4}},0 mm teshikka ega kapillyar orqali o'tkazgandan so'ng, kapillyarning ikki uchini olov bilan yoping. Kapillyar shisha slaydga plastik qog'oz bilan o'rnatildi va qorong'i maydonda yuqori quvvatli ob'ektiv ostida kuzatildi.
Bo'yalgan mikrob namunalarini mikroskop bilan kuzatish:
Bakteriya namunasi bo'yalganidan so'ng, bakteriyalar va atrof-muhit o'rtasidagi rangning keskin kontrasti tufayli bakteriyalarning morfologik xususiyatlari (masalan, o'lchami, shakli, joylashuvi va boshqalar) bakteriyalar va ba'zi maxsus tuzilmalar bo'lishi mumkin. oddiy optik mikroskop ostida (masalan, kapsulalar, flagellalar, sporlar va boshqalar) aniq kuzatiladi va bakteriyalarni bo'yash reaktivligiga ko'ra tasniflash va aniqlash mumkin.
(1) Bakterial bo'yashning umumiy tartibi Bakterial bo'yashning umumiy tartibi: surtish (quritish) - fiksatsiya - bo'yash.
1. Smear Qon, sekretsiya, ekskretsiya, ponksiyon suyuqligi va suyuqlik kulturasini tayyorlash va shisha slaydlarga to'g'ridan-to'g'ri yupqa plyonka surtish; otopsiya yoki yuqtirilgan hayvon to'qimalari, namuna olish uchun lezyonni paxta sumkasi bilan surting. Qattiq muhitda bakterial koloniyalar yoki maysazorlarni tayyorlash uchun, avval oddiy sho'r eritmaning halqasini olish va slaydning o'rtasiga qo'yish uchun emlash halqasidan foydalaning, so'ngra oz miqdorda kultura olib, uni maydalash uchun steril emlash halqasidan foydalaning. oddiy sho'r suvda teng ravishda, va uni 1 sm2 katta yoki kichik bo'yalgan yuzalarga tarqating, uni xona haroratida tabiiy ravishda quriting yoki masofadan turib asta-sekin quriting.
2. Fiksatsiyaning maqsadi bakteriyalarni o'ldirish, bakteriya oqsili va tuzilishini koagulyatsiya qilish va bo'yashni osonlashtirishdir; yuvish paytida suv bilan yuvilib ketmaslik uchun bakteriyalarni slaydga yopishib olishiga yordam bering; bakteriyalarning bo'yoqlarga o'tkazuvchanligini o'zgartiring, bu bakteriya hujayralarining binoni tuzilishi uchun foydalidir. Odatda olov bilan qizdirish yo'li bilan o'rnatiladi va quritilgan smear tezda olovdan 3 marta o'tadi. Slaydga tegsa, qo'lning orqa qismidagi terini kuydirmaslik yaxshiroqdir.
3. Bo'yash Turli tekshirish maqsadlariga ko'ra, bo'yash uchun turli xil bo'yash usullarini tanlang. Bo'yash paytida, qoplamani oshirish uchun bo'yoq eritmasini tomchilab qo'shing.
4. Mordant Bo'yoq va bo'yalgan narsa o'rtasidagi yaqinlikni kuchaytiruvchi, bo'yoqni bo'yalgan ob'ektga mahkamlash va hujayra membranasining o'tkazuvchanligini o'zgartirishga olib keladigan har qanday moddaga mordant deyiladi. Odatda alum, tanin kislotasi, metall tuzlari va yod va boshqalar ishlatiladi va rang berishni targ'ib qilish uchun isitish ham ishlatiladi. Mordantlar birlamchi bo'yash va qarama-qarshi bo'yash o'rtasida qo'llanilishi mumkin, shuningdek, fiksatsiyadan keyin yoki fiksator va bo'yash tarkibida bo'lishi mumkin.
5. Rangsizlantirish Bo'yalgan ob'ektning rangini yo'qotadigan har qanday kimyoviy vosita rangsizlantiruvchi deyiladi. Dekolorizatsiya sifatida odatda etanol, aseton va boshqalar ishlatiladi. Rangsizlantiruvchi vosita bakteriyalar va bo'yoqlar birikmasining barqarorlik darajasini aniqlay oladi, bu esa differentsial bo'yash uchun ishlatilishi mumkin.
6. Qarama-qarshi bo'yoq Bakteriyalar yoki ularning rangsizlangan tuzilmalari kuzatishni osonlashtirish uchun ko'pincha qarama-qarshi bo'yoq eritmasi bilan bo'yaladi. Qarama-qarshi eritmaning rangi keskin kontrast hosil qilish uchun asosiy bo'yash eritmasidan farq qiladi. Qarama-qarshi bo'yoq juda kuchli bo'lmasligi kerak, shuning uchun dastlabki binoni rangini yashirmaslik kerak.
