Ikki fotonli floresan mikroskopiya nima
Ikki fotonli qo'zg'alishning asosiy printsipi: yuqori foton zichligi bo'lsa, lyuminestsent molekulalar bir vaqtning o'zida ikkita uzun to'lqinli fotonni o'zlashtira oladi va qo'zg'aluvchan holat deb ataladigan qisqa vaqtdan keyin qisqaroq to'lqinli fotonni chiqaradi. . ; effekt floresan molekulani qo'zg'atish uchun to'lqin uzunligi yarmi uzun to'lqin uzunligi bo'lgan fotonni ishlatish bilan bir xil. Ikki fotonli qo'zg'alish yuqori foton zichligini talab qiladi. Hujayralarga zarar bermaslik uchun ikki fotonli mikroskop yuqori energiyali rejimda qulflangan impulsli lazerlardan foydalanadi. Ushbu lazer tomonidan chiqariladigan lazer yuqori cho'qqi energiyasiga va past o'rtacha energiyaga ega, uning puls kengligi atigi 100 femtosekundni tashkil qiladi va uning chastotasi 80 dan 100 megahertzgacha yetishi mumkin. Impulsli lazerning fotonlarini fokuslash uchun yuqori raqamli diafragma ob'ektiv linzalaridan foydalanganda, ob'ektiv linzaning markazlashtirilgan nuqtasida foton zichligi eng yuqori bo'ladi va ikki fotonli qo'zg'alish faqat ob'ektiv linzaning markazlashtirilgan nuqtasida sodir bo'ladi, shuning uchun ikki fotonli mikroskopga konfokal pin teshigi kerak emas, bu Flüoresansni aniqlash samaradorligini oshiradi.
Umumiy floresans hodisalarida, qo'zg'atuvchi yorug'likning past foton zichligi tufayli, floresan molekula bir vaqtning o'zida faqat bitta fotonni o'zlashtirishi mumkin va keyin radiatsiyaviy o'tish orqali floresan fotonni chiqaradi, bu bitta fotonli floresan. Yorug'lik manbai sifatida lazerdan foydalangan holda floresan qo'zg'atish jarayoni uchun ikki fotonli yoki hatto ko'p fotonli floresan paydo bo'lishi mumkin. Bu vaqtda ishlatiladigan qo'zg'atuvchi yorug'lik manbasining intensivligi yuqori va foton zichligi bir vaqtning o'zida ikkita fotonni o'zlashtiradigan floresan molekulalarning talablariga javob beradi. Umumiy lazerni qo'zg'atuvchi yorug'lik manbai sifatida ishlatish jarayonida foton zichligi hali ham ikki fotonli yutilish hodisasini ishlab chiqarish uchun etarli emas. Odatda, femtosekundli impulsli lazer ishlatiladi va uning bir lahzali kuchi megavattgacha bo'lishi mumkin. Shuning uchun, ikki fotonli floresansning to'lqin uzunligi qo'zg'atuvchi yorug'likning to'lqin uzunligidan qisqaroqdir, bu qo'zg'alish to'lqin uzunligining yarmida qo'zg'alish natijasida hosil bo'lgan effektga teng.
