Mikroskopni kuzatishning ikkita umumiy usuli
1. Qorong'i maydonni kuzatish
Qorong'i maydonni kuzatish qorong'u maydon yoritilishidan foydalanadi. Yorqin maydonni kuzatishdan farqli o'laroq, yorituvchi yorug'lik to'g'ridan-to'g'ri ko'rilmaydi; faqat namuna tomonidan aks ettirilgan yoki diffraksiyalangan yorug'lik aniqlanadi. Natijada, ko'rish maydoni qorong'i fonga ega bo'lib, namuna yorqin ko'rinadi.
Qorong'i maydonni kuzatish optikadagi Tyndall effektiga asoslanadi. Chang zarralari yorug'lik diffraktsiyasi tufayli to'g'ridan-to'g'ri kuchli yorug'lik ostida inson ko'ziga ko'rinmaydi. Yorug'lik zarrachalarga qiya bo'lganda, yorug'lik aksi zarrachalarni kattalashgan va ko'rinadigan qilib ko'rsatadi.
Qorong'i maydonni kuzatish uchun zarur bo'lgan maxsus aksessuar qorong'u maydon kondensatoridir. Bu yorug'lik nurining namuna orqali vertikal yuqoriga o'tishini oldini oladi. Buning o'rniga, namunani qiyshiq burchak ostida yoritish uchun yorug'likni qayta yo'naltiradi. Yorituvchi yorug'lik to'g'ridan-to'g'ri ob'ektiv linzaga kirmaydi va yorqin tasvirlar namuna yuzasidan aks ettirilgan va diffraktsiyalangan yorug'lik bilan hosil bo'ladi. Qorong'i maydonni kuzatishning ruxsati yorqin maydonni kuzatishdan ancha yuqori bo'lib, 0,02-0,004 mkm ga etadi.
2. Fazali kontrastli mikroskopiya
Optik mikroskoplarni ishlab chiqishda fazali kontrastli mikroskopiya ixtirosi zamonaviy mikroskopiyaning asosiy yutug'idir. Inson ko'zi faqat yorug'lik to'lqinlarining to'lqin uzunligini (rangini) va amplitudasini (yorqinligini) ajrata oladi. Rangsiz va shaffof biologik namunalar uchun yorug'lik to'lqin uzunligi yoki amplitudasi biroz o'zgargan holda o'tadi, bu ularni yorqin maydon sharoitida kuzatishni qiyinlashtiradi.
Fazali kontrastli mikroskop namunaning optik yo'l farqiga asoslangan holda tekshirishni amalga oshiradi. Fazalar farqlarini (inson ko'ziga ko'rinmas) ajralib turadigan amplituda farqlariga aylantirish uchun yorug'likning aralashuvidan samarali foydalanadi. Hatto rangsiz shaffof moddalarni ham aniq tasavvur qilish mumkin. Bu tirik hujayralarni kuzatishni sezilarli darajada osonlashtiradi, shuning uchun fazali kontrastli mikroskop teskari mikroskoplarda keng qo'llaniladi.
Fazali kontrastli mikroskopning asosiy printsipi namuna orqali uzatiladigan ko'rinadigan yorug'likning optik yo'l farqini amplituda farqiga aylantirish va shu bilan turli tuzilmalar orasidagi kontrastni yaxshilash va ularni aniq ko'rinadigan qilishdir. Namuna orqali o'tgandan so'ng, yorug'lik sinadi, asl yo'lidan chetga chiqadi va to'lqin uzunligining 1/4 qismiga sekinlashadi. 1/4 to'lqin uzunligidagi qo'shimcha kechikish yoki oldinga siljish 1/2 to'lqin uzunligidagi umumiy optik yo'l farqiga olib keladi. Ikkita nur bir-birining ustiga o'rnatiladi va aralashadi, kontrastni kuchaytirish uchun amplitudani oshiradi yoki kamaytiradi. Strukturaviy jihatdan fazali kontrastli mikroskop uni oddiy optik mikroskoplardan ajratib turadigan ikkita maxsus xususiyatga ega.
