Lazerli konfokal mikroskop va an'anaviy optik mikroskop o'rtasidagi farq
Lazerli skanerlash konfokal floresan mikroskopi nisbatan rivojlangan molekulyar va hujayra biologiyasini tahlil qilish vositasi bo'lib, biologik namunalarning uch o'lchovli ma'lumotlarini olish uchun kompyuter, lazer va tasvirni qayta ishlash texnologiyasidan foydalanadi. U asosan tirik hujayralar tuzilishini va muayyan molekulalar va ionlarning biologik o'zgarishlarini kuzatish, miqdoriy tahlil qilish va real vaqt rejimida miqdoriy aniqlash uchun ishlatiladi.
Lazerli konfokal mikroskopiya printsipi: yorug'lik manbai orqasida joylashgan yoritish teshigidan va nuqta yoritilishini va nuqtani aniqlashni amalga oshirish uchun detektor oldiga o'rnatilgan aniqlovchi pin teshigidan foydalaning. Yoritish teshigi orqali yorug'lik manbasidan chiqadigan yorug'lik namunaning fokus tekisligidagi nuqtaga qaratiladi va bu nuqtadan chiqarilgan flüoresans aniqlash teshigida tasvirlanadi va bu nuqtadan tashqarida chiqarilgan har qanday yorug'lik aniqlovchi tomonidan bloklanadi. pin teshigi. Yoritish teshigi va aniqlash pin teshigi nurlangan nuqta yoki aniqlangan nuqta bilan konjugatsiyalanadi, shuning uchun aniqlangan nuqta konfokal nuqta, aniqlangan nuqta joylashgan tekislik esa konfokal tekislikdir.
Kompyuter aniqlangan nuqtalarni kompyuter ekranida tasvir nuqtalari ko'rinishida ko'rsatadi. To'liq tasvirni yaratish uchun optik yo'lda skanerlash tizimi to'liq konfokal tasvirni yaratish uchun namunaning fokus tekisligini skanerlaydi. Bosqich Z o'qi bo'ylab yuqoriga va pastga harakatlanar ekan, namunaning yangi qatlami konfokal tekislikka o'tkaziladi va namunaning yangi qatlami monitorda tasvirlanadi. Z o'qining uzluksiz harakati bilan namunaning turli qatlamlarining uzluksiz tasvirlarini olish mumkin. Yengil kesilgan rasm.
An'anaviy yorug'lik mikroskoplari o'rtasidagi farq
An'anaviy lyuminestsent mikroskoplar bartaraf etilmaydigan kamchilikka ega: fokus tekisligidan tashqaridagi floresan tuzilmalar loyqa va xiralashgan. Buning sababi shundaki, ko'pchilik biologik namunalar bir-birining ustiga chiqadigan tuzilmalarga ega. Agar lyuminestsent yorliqli tuzilmalar turli darajalarda taqsimlansa va bir-birining ustiga chiqsa, fokus tekisligidan yuqoridan yoki pastdan tarqalgan tarqoq floresans ham ob'ektiv linzalar tomonidan qabul qilinadi va floresan mikroskopning o'lchamlari sezilarli darajada yaxshilanadi. kamaytirish.
An'anaviy optik mikroskoplar asosida lazerli skanerlash konfokal mikroskoplari yorug'lik manbai sifatida lazer nuridan foydalanadi, konjugat fokuslash printsipi va qurilmasini qabul qiladi va raqamli tasvirni qayta ishlash, kuzatish, tahlil qilish va kuzatilgan ob'ektlarni chiqarish uchun kompyuterlardan foydalanadi. Namuna hujayralarning uch o'lchovli fazoviy tuzilishini buzmasdan kuzatish va tahlil qilish uchun tomografik skanerdan o'tkazilishi va tasvirlanishi mumkin. Shu bilan birga, immunofluoresan yorliqlash va ion lyuminestsent yorliqlash zondlaridan foydalangan holda, ushbu texnologiya nafaqat qo'zg'almas hujayralar va to'qimalar bo'limlarini kuzatish, balki tirik hujayralarning tuzilishi, molekulalari, ionlari va hayotiy faoliyatini real vaqtda dinamik kuzatish va aniqlash, Hujayra osti darajasida Ca2 plyus, pH qiymati, membrana salohiyati va hujayra morfologiyasidagi o'zgarishlar kabi fiziologik signallarni kuzatish morfologiya, molekulyar hujayra biologiyasi, nevrologiya, farmakologiya va genetika sohalarida kuchli tadqiqot vositalarining yangi avlodiga aylandi.
