Mikroorganizmlarni bo'yash usullari va mikroskopik kuzatish
1. Maqsad
1.1 Mikrob surtmalari va bo'yashning asosiy usullarini o'rganing.
1.2 Bakteriyalarni oddiy bo'yash usulini o'zlashtiring.
1.3 Bakteriyalarning morfologik xususiyatlarini oldindan tushunish va moyli linzalardan foydalanish va aseptik ishlash texnikasi haqidagi bilimlarni mustahkamlash.
2 tamoyillar
Bakteriyalarni surtish va bo'yash mikrobiologiya tajribalarining asosiy usuli hisoblanadi. Bakterial hujayralar kichik va shaffof bo'lib, ularni oddiy yorug'lik mikroskopi ostida aniqlash qiyin; ular bo'yalgan bo'lishi kerak. Bakteriyalarni bo'yash uchun bitta bo'yoq ishlatiladi, shuning uchun bo'yalgan bakteriyalar fondan aniq rang farqini hosil qiladi, shuning uchun ularning morfologiyasi va tuzilishi aniqroq kuzatilishi mumkin. Bu usulni ishlatish oson va bakteriya hujayralarining umumiy shakli va bakteriyalarning joylashishini kuzatish uchun javob beradi. Oddiy bo'yash uchun asosiy bo'yoqlar odatda qo'llaniladi. Buning sababi shundaki, neytral, ishqoriy yoki kuchsiz kislotali eritmalarda bakteriya hujayralari odatda manfiy zaryadlanadi, asosiy bo'yoqlar ionlashganda ularning molekulalarining bo'yash qismi musbat zaryadlanadi, shuning uchun ular ishqoriydir. Bo'yoqning bo'yalgan qismi ularni rang berish uchun bakteriyalar bilan osongina birlashadi. Bo'yalgan bakterial hujayralar fon bilan keskin farq qiladi, bu ularni mikroskop ostida aniqlashni osonlashtiradi. Oddiy bo'yash uchun keng qo'llaniladigan bo'yoqlar orasida metilen ko'k, kristalli binafsha, asosiy fuksin va boshqalar kiradi. Bakteriyalar shakarni parchalab, kislota hosil qilganda, madaniy muhitning pH darajasi pasayganda, bakteriyalarning musbat zaryadi ortadi. Bu vaqtda bo'yash uchun eozin, kislota fuchsin yoki Kongo qizil kabi kislotali bo'yoqlardan foydalanish mumkin. Bo'yashdan oldin bakteriyalarni tuzatish kerak. Uning ikkita maqsadi bor: biri bakteriyalarni o'ldirish va ularni shisha slaydga yopishib olish; ikkinchisi ularning bo'yoqlarga yaqinligini oshirishdir. Ikkita keng tarqalgan usul - isitish va kimyoviy fiksatsiya. Fikslashda hujayralarning asl shaklini saqlab qolishga harakat qiling.
3 ta materiallar
3.1 Bakteriyalar: Bacillus subtilis 12-18h ozuqaviy agar qiyshiq kulturasi, Staphylococcus aureus 24 soat ozuqaviy agar ekin kulturasi, Escherichia coli 24 soat ozuqaviy agar qiya kulturasi, novvoy xamirturushli agar qiya kulturasi.
3.2 Bo'yash vositasi: Lu ning gidroksidi metilen ko'k bo'yog'i (yoki ammoniy oksalat kristalli binafsha rangli bo'yoq), karbol kislotasi fuchsin bo'yog'i.
3.3 Asboblar yoki boshqa asboblar: mikroskop, spirt lampasi, slayd, emlash halqasi, slayd tokchasi, ikki qavatli shisha (tarkibida sadr yog‘i va ksilen bo‘lgan), linza to‘qimasi, fiziologik sho‘r suv yoki distillangan suv va boshqalar.
4. Jarayon: surtish → quritish → fiksatsiya → bo‘yash → yuvish → quritish → mikroskopik tekshirish.
5 qadam
5.1 Smear: Ikkita toza va yog'siz shisha slaydni oling. Steril sharoitda shisha slaydning har bir markaziga kichik tomchi oddiy sho'r (yoki distillangan suv) qo'ying. Bakteriyalarni Bacillus subtilis dan sterilizatsiya qilish uchun emlash halqasidan foydalaning. , Micrococcus luteus va Escherichia coli, eğimli suv tomchilarida bir oz bakterial maysazorni tanlab, yaxshilab aralashtiramiz va uni nozik bir plyonkaga qo'llang. Agar siz bakterial suspenziya (yoki suyuq kultura) smearidan foydalansangiz, 2 dan 3 gacha ilmoqni tanlab olish va ularni to'g'ridan-to'g'ri slaydga qo'llash uchun emlash halqasidan foydalanishingiz mumkin. Ehtiyot bo'ling, juda ko'p fiziologik sho'r (distillangan suv) tushirmang va bakteriyalarni olib tashlang va uni juda qalin emas, bir tekisda qo'llang.
5.2 Quritish Xona haroratida tabiiy ravishda quriting. Bundan tashqari, uni quritish uchun qoplangan tomoni yuqoriga qaratib, spirtli chiroq ustida biroz qizdirishingiz mumkin. Ammo olovga juda yaqinlashmaslikka ishonch hosil qiling, chunki juda yuqori harorat bakteriyalarning morfologiyasini buzadi.
5.3 Fiksatsiya Agar qizdirilgan quritish ishlatilsa, mahkamlash va quritish bir bosqichda birlashtiriladi va usul quritish bilan bir xil. Smear, quruq va issiqlik bilan mahkamlang.
5.4 Bo'yash: Slaydni slayd tokchasiga tekis qilib qo'ying va smear ustiga 1-2 tomchi bo'yoq eritmasidan qo'shing (bo'yoq eritmasi smear plyonkasini shunchaki yopish uchun mos keladi). 1-2 daqiqa davomida Lu ning asosiy metilen ko'k rangi bilan bo'yash va taxminan 1 daqiqa davomida fuksin karbol kislotasi (yoki ammoniy oksalat kristalli binafsha) bilan bo'yash.
5.5 Suv bilan yuvish: bo'yoq eritmasini to'kib tashlang va slaydning bir chetidan smeardan oqayotgan suv rangsiz bo'lguncha musluk suvi bilan yaxshilab yuvib tashlang. Suv bilan yuvilganda, qoplangan sirtni to'g'ridan-to'g'ri suv bilan yuvmang. Smear plyonkasi tushishiga yo'l qo'ymaslik uchun suv oqimi juda tez yoki juda katta bo'lmasligi kerak.
5.6 Quritish: Slayddagi suv tomchilarini silkitib oling va tabiiy ravishda quriting, sochlarini fen bilan quriting yoki changni yutish qog'oz bilan so'ring (bakteriyalarni artib yubormaslik uchun ehtiyot bo'ling). 5.7 Mikroskopik tekshirish Smear quruq bo'lgandan keyin mikroskopik tekshirishni o'tkazing. Yog 'linzalari bilan ko'rishdan oldin smear to'liq quruq bo'lishi kerak.
6 Natijalar Bir marta bo'yashdan keyin kuzatilgan E. coli va Micrococcus luteus morfologiyasini chizing.
