Mikroorganizmlarni bo'yash usullari va mikroskopik kuzatish
Bakteriyalarni oddiy bo'yash
1 Maqsadlar
1.1 Mikroblarni surtish va bo'yashning asosiy usullarini o'rganish.
1.2 Bakteriyalarni oddiy bo'yash usulini o'zlashtirish.
1.3 Bakteriyalarning morfologik xususiyatlari bilan tanishish, moy oynasidan foydalanish va aseptik operatsiya usullarini o'rganishni mustahkamlash.
2 Prinsip Bakteriyalarni surtish va bo'yash mikrobiologiya tajribalarining asosiy usuli hisoblanadi. Bakteriyalarning hujayralari kichik va shaffof bo'lib, ularni oddiy yorug'lik mikroskopi ostida tanib olish oson emas va ular bo'yalgan bo'lishi kerak. Bakteriyalarni bo'yash uchun bitta bo'yoqdan foydalanish, bo'yalgan organizm va fon aniq rang farqini hosil qilish uchun, ularning morfologiyasi va tuzilishini aniqroq kuzatish mumkin. Bu usulni bajarish oson va organizmning umumiy shakli va bakteriyalarning joylashishini kuzatish uchun javob beradi. Ishqoriy bo'yoqlar odatda oddiy bo'yash uchun ishlatiladi, chunki neytral, ishqoriy yoki zaif kislotali eritmalarda bakteriya hujayralari odatda manfiy zaryadlanadi va ishqoriy bo'yoqlar ionlanganda ularning molekulalarining bo'yalgan qismi musbat zaryadlanadi, shuning uchun ishqoriy bo'yoqlarning bo'yash qismi. bakteriyalarni rangli qilish uchun bakteriyalarga osongina bog'lanishi mumkin. Bo'yalgan bakterial hujayralar fon bilan keskin farq qiladi va mikroskop ostida tanib olish osonroq. Oddiy binoni uchun tez-tez ishlatiladigan bo'yoqlar orasida merosiyanin ko'k, kristalli binafsha va asosiy birikma qizil. Shakarning bakterial parchalanishi kislota hosil qilganda, muhitning pH qiymati pasayadi, bakteriyalarning ijobiy zaryadi ortadi va keyin qizil, kislotali qizil yoki Kongo qizil va boshqa kislotali bo'yoqlarni bo'yashda foydalanish mumkin. Bo'yashdan oldin bakteriyalarni tuzatish kerak. Uning maqsadi ikki xil: biri bakteriyalarni o'ldirish va bakteriyalarni slaydga yopishib olish; ikkinchisi - bo'yoqqa bo'lgan yaqinligini oshirish. Odatda ikkita usul qo'llaniladi: isitish va kimyoviy fiksatsiya. Fikslashda hujayralarning asl morfologiyasini saqlab qolishga harakat qiling.
3 Materiallar
3.1 shtammi Bacillus subtilis 12-18h ozuqaviy agar qiya kulturasi, Staphylococcus aureus taxminan 24 soat ozuqaviy agar qiya kulturasi, Escherichia coli 24 soat ozuqaviy agar qiya kulturasi, novvoy xamirturushli agar qiya kulturasi.
3.2 Lyuning ishqoriy metilen ko'k dog'ini (yoki ammoniy oksalat kristalli binafsha rang), karbol kislotasi birikmasi qizil dog'ini bo'yash.
3.3 Asboblar yoki boshqa jihozlar Mikroskop, spirtli chiroq, slayd, emlash halqasi, slayd ushlagich, ikki qavatli shisha (sidr yog'i va ksilen bilan to'ldirilgan), mikroskop qog'ozi, fiziologik sho'r yoki distillangan suv va boshqalar.
4 Protsedura Smear → quritish → fiksatsiya → binoni → yuvish → quritish → mikroskopik tekshirish.
5 qadam
5.1 smear Ikkita toza va yog'siz slaydni oling, ularning har birida aseptik sharoitda slaydning o'rtasiga kichik tomchi sho'r suv (yoki distillangan suv) solingan, mos ravishda Bacillus subtilis, Garcinia micrococcus dan aseptik tarzda ishlaydigan emlash halqasi bilan. va Escherichia coli eğimli suv tomchisida bir oz mox terib, aralashtirish va kino bilan qoplangan. Agar bakterial suspenziya (yoki suyuq kultura) smear bo'lsa, to'g'ridan-to'g'ri slaydga 2 dan 3 tagacha halqani ekish uchun ishlatilishi mumkin. E'tibor bering, sho'r suv (distillangan suv) va bakteriyalarni olib, juda ko'p bo'lmasligi va bir tekis tarqalmasligi kerak, juda qalin emas.
5.2 Quritish Xona haroratida tabiiy ravishda quriting. Bundan tashqari, u qoplangan tomoni yuqoriga qarab spirtli chiroq ustida biroz qizdirish orqali quritilishi mumkin. Biroq, olovga juda yaqinlashmang, chunki harorat juda yuqori bakteriyalarning morfologiyasini buzadi.
5.3 Fiksatsiya Agar issiqlik bilan quritish ishlatilsa, mahkamlash va quritish xuddi quritish bilan bir xil tarzda bir bosqichda birlashtiriladi. Smear, quriting va issiqlik bilan mahkamlang.
5.4 Bo'yash Slaydni slayd tokchasiga tekis qo'ying, smearga 1-2 tomchi bo'yash eritmasidan qo'shing (bo'yash eritmasi faqat smear plyonkasini qoplaydi, mos keladi). Smearni Lü's Basic Mellanox Blue bilan 1-2 daqiqa davomida va karbonat qizil (yoki ammoniy oksalat kristalli binafsha) bilan taxminan 1 daqiqa davomida bo'yab qo'ying.
5.5 Chayish Bo'yash eritmasini to'kib tashlang va slaydning bir chetidan smeardan oqayotgan suv rangsiz bo'lguncha musluk suvi bilan yaxshilab chaying. Durulama paytida, qoplangan sirtni yuvish uchun to'g'ridan-to'g'ri suv oqimiga yo'l qo'ymang. Smear plyonkasini olib tashlamaslik uchun suv oqimi juda tez yoki juda katta bo'lmasligi kerak.
5.6 Quritish Tabiiy quritish uchun slayddagi suv tomchilarini silkiting, quritish uchun fen bilan quriting yoki changni yutish qog'ozdan foydalanish mumkin (bakteriya tanasini artib yubormaslik uchun ehtiyot bo'ling). 5.7 Mikroskopik tekshirish smear quritiladi va mikroskopda tekshiriladi. Yog 'mikroskopi bilan kuzatishdan oldin smear to'liq quruq bo'lishi kerak.
6 Natijalar E. coli va Micrococcus garciniae morfologiyasini bir marta bo'yashdan keyin chizing.
Gram bo'yoq
1 Maqsad
1.1 Gram bo'yash tamoyilini va uning bakteriyalarni tasniflash va aniqlashdagi ahamiyatini tushunish.
1.2 Gram bo'yash texnikasini o'rganish va o'zlashtirish va yorug'lik mikroskopining moyli linzalaridan foydalanishni o'rganishni mustahkamlash.
