Floresan mikroskopiya uchun namuna tayyorlash talablari
Floresan mikroskopiya uchun namuna tayyorlashga qo'yiladigan talablar
(1) Shisha slayd
Slayd oynasining qalinligi 0.8-L2mm orasida boʻlishi kerak. Juda qalin slayd bir tomondan ko'proq yorug'likni o'zlashtiradi va boshqa tomondan qo'zg'atuvchi nurni namunaga qarata olmaydi. Slaydlar silliq, qalinligi bir xil bo'lishi va aniq avtoflüoresansdan xoli bo'lishi kerak. Ba'zan kvarts slaydlari ishlatiladi.
(2) Shishani yoping
Qopqoq oynasining qalinligi taxminan 0.17 mm, silliq. Qo'zg'atuvchi yorug'likni kuchaytirish uchun interferentsiyali qopqoq oynasi ham ishlatilishi mumkin, bu turli xil to'lqin uzunlikdagi yorug'likka turli interferentsiya ta'siriga ega bo'lgan bir necha qatlamli moddalar (masalan, magniy ftorid) bilan qoplangan maxsus qopqoq oynasi bo'lib, bu yorug'lik nuriga ta'sir qilishi mumkin. floresan silliq. Qo'zg'atuvchi yorug'lik orqali o'tadi va qo'zg'atuvchi yorug'lik aks etadi va bu aks ettirilgan qo'zg'alish nuri namunani qo'zg'atishi mumkin.
(3) Namuna
To'qimalarining bo'laklari yoki boshqa namunalar juda qalin bo'lmasligi kerak. Qalinligi juda qalin bo'lsa, qo'zg'atuvchi nurning katta qismi namunaning pastki qismida iste'mol qilinadi, ob'ektiv linzalar tomonidan bevosita kuzatilgan yuqori qism esa to'liq qo'zg'almaydi. Bundan tashqari, bir-birining ustiga tushgan hujayralar yoki aralashmalar, fonning o'ziga xos bo'lmagan binoni natijasida yuzaga kelgan floresans hukmga ta'sir qiladi.
(4) oyna moyi
Odatda, qorong'u maydonli floresan mikroskoplar va moyli immersion mikroskoplar yordamida namunalarni kuzatishda immersion moydan foydalanish kerak. Maxsus floresan bo'lmagan immersion moydan foydalanish yaxshidir. Buning o'rniga glitserin ham ishlatilishi mumkin va suyuq kerosin ham ishlatilishi mumkin, ammo sinishi indeksi past, bu tasvir sifatiga ozgina ta'sir qiladi.
Floresan mikroskopining yorug'lik kubini tushunish
Floressensiya - bu moddadagi elektronlar yorug'lik energiyasini past energiyali holatdan yuqori energiyali holatga o'zlashtiradigan yorug'likdir, keyin esa past energiyali holatga qaytganida yorug'lik chiqaradi. Bu harorat bo'lmagan nurlanish - luminesans. Ya'ni: modda qisqa to'lqinli yorug'likni o'zlashtiradi, hayajonlangan holatga kiradi va uzoq to'lqinli yorug'likni chiqaradi.
Moddaning avtoflüoresansi, flüoresan bo'yoq yoki termoyadroviy bilan ifodalangan floresan oqsil bo'ladimi, u yorug'likning ma'lum bir to'lqin uzunligi (qo'zg'alish) bilan qo'zg'atilishi kerak. Elektronlar ko'chib o'tgandan va energiyani yo'qotgandan so'ng, ular ma'lum bir uzun to'lqin uzunligidagi yorug'likni chiqaradilar (Emissiya). , aniq flüoresansni aniqlash funktsiyasiga erishish uchun aniqlash tizimi tomonidan to'planishi mumkin.
Floresan yorug'lik kubi nima?
Floresan mikroskopni kuzatish va tasvirlashda ma'lum to'lqin uzunligining qo'zg'atuvchi nuri va mos keladigan uzun to'lqinli emissiya nuri floresan yorug'lik kubi tomonidan ta'minlanadi, shuning uchun floresans signali yalang'och ko'z, displey ekrani yoki kamera tomonidan to'planishi mumkin. Shuning uchun, lyuminestsent yorug'lik kubi nimani aniqlash mumkinligini aniqlaydi Floresans signalining asosiy qurilmasi, uning xususiyatlariga EX kiradi: qo'zg'alish to'lqin uzunligi filtri parametrlari, EM: emissiya to'lqin uzunligi filtri parametrlari va DM: dichotomous oyna parametrlari. Misol sifatida Revolve integratsiyalashgan floresan mikroskopining DAPI yorug'lik kubini oling, EX: 385/30, EM: 450/50, DM: 425.
The light emitted by the light source passes through DAPI EX to obtain excitation light in a specific wavelength range, that is, light of 385±15nm, which specifically excites fluorescent substances that can only be excited within this range; the DM dichroic mirror separates the excitation light from the fluorescence Optical elements, as special mirrors, reflect only specific wavelengths of light and allow all other wavelengths to pass through, so only >EM ga 425 nm yorug'lik uzatilishi mumkin; EM emissiya filtrlari florofor chiqaradigan floresansni boshqa fondan yorug'likni ajratish uchun optik elementlardan ajratish uchun ishlatiladi. Emissiya filtrlari qo'zg'atuvchi yorug'lik manbasidan (namuna yoki optikadan aks ettirilgan) oqib chiqadigan barcha boshqa yorug'liklarni to'sib qo'ygan holda, floresan to'lqin uzunligida yorug'likni dikroik oyna orqali o'tkazadi. Chiqarilgan yorug'lik to'lqin uzunligi kuzatilishi kerak bo'lgan EM dan kattaroqdir, ya'ni aniqlash tizimiga faqat 450 ± 25 nm diapazonidagi yorug'lik kiradi. EX, EM filtrlari va DM dixotomiyalarini to'g'ri tanlash tadqiqotchilarga yuqori signal-shovqin nisbatlariga (S/N) erishishga yordam beradi.
