Mikroskopiya uchun odatiy namunalarni tayyorlashga qo'yiladigan talablar
Konfokal mikroskop 1980-yillarda ishlab chiqilgan davrni yaratuvchi yuqori texnologiyali yangi mahsulot bo'lib, bugungi kunda molekulyar biologiya va hayot haqidagi muhim tahliliy asboblardan biridir. Konfokal mikroskopiya lazerli skanerlash moslamasi qo'shilgan lyuminestsent mikroskopni tasvirlashga asoslangan bo'lib, hujayralar yoki to'qimalar ichidagi mikrostrukturaning lyuminestsent tasvirlarini olish va hujayra osti darajasida ko'plab fiziologik signal mashinalarining morfologiyasidagi o'zgarishlarni kuzatish uchun tasvirni qayta ishlash uchun kompyuterdan foydalanadi. Morfologiya, molekulyar hujayra biologiyasi, nevrologiya, farmakologiya, genetika va boshqa ilmiy sohalarda kuchli tadqiqot vositasiga aylaning.
Konfokal mikroskopiya uchun namuna tayyorlash aniqlashdan oldin muhim qadamdir. Namunalar lyuminestsent zondlar bilan etiketlanishi kerak (bitta, ikki, uch).
ning
Namunalar qo'zg'almas yoki tirik to'qimalar yoki qo'zg'almas yoki jonli yopishtiruvchi madaniyatlar bo'lishi mumkin. Hujayralarni Confocal maxsus kichik madaniyatli idishlar yoki qopqoqlarda etishtirish kerak. Hujayralarni to'xtatib turing, bo'laklarni silkiting yoki tushiring va qopqoq plyonkasi bilan yoping. Namunaning Zda qalinligi taxminan 1 ~ 2 mm, ishlatiladigan qopqoq oynasining qalinligi 0.17 mm dan kam bo'lishi kerak va slayd oynasining qalinligi 0.8 ~ 1,2 orasida bo'lishi kerak. mm va sirt silliq, qalinligi bir xil va aniq shovqin floresansi yo'q. Ruxsat etilgan namunalar uchun o'rnatish muhiti ko'pincha ishlatiladi va pH 8.5-9 bilan PBSda tayyorlangan glitserin odatda o'rnatish uchun ishlatiladi.
Namuna tayyorlash uchun odatiy talablar:
1. Bo'yoqlarni tanlash
Konfokal mikroskop yorug'lik manbai sifatida bir to'lqinli uzunlikdagi lazerdan foydalanganligi sababli, lyuminestsent bo'yoqlarni tanlash konfokal mikroskop bilan jihozlangan lazerning to'lqin uzunligiga asoslangan bo'lishi kerak. Xuddi shu namunada bir nechta floresan bo'yoqlar mavjud bo'lsa, ularning emissiya to'lqin uzunligini ham imkon qadar ko'proq hisobga olish kerak. Rang o'rtasidagi muammolarni oldini olish uchun bir-biriga yopishmang.
2. Namuna tashuvchini tanlash
Odatda, konfokal mikroskopning yuqori quvvatli ob'ektiv linzalari yog 'linzalari bo'lib, uning raqamli diafragma kichik va linzalar va namuna o'rtasidagi ish masofasi 0.17 mm dan oshmasligi kerak. Slaydlar va qoplamalar yaxshi. Agar u to'xtatilgan hujayralar yoki to'xtatilgan zarralar bo'lsa, namunani kuzatish uchun olib borish uchun konfokal mikroskopga bag'ishlangan Petri idishidan foydalanish mumkin.
3. O'rnatish muhitini tanlash
Namuna faqat bir marta kuzatilishi kerak bo'lsa va floresan osonlik bilan o'chirilmasa, slaydni yopish uchun glitserin aralashmasining ma'lum bir konsentratsiyasini tanlashingiz mumkin. Agar namunani ma'lum vaqt davomida joylashtirish va bir necha marta olish kerak bo'lsa, floresan signallarining yo'qolishini kamaytirish uchun floresanga qarshi söndürme o'rnatish muhitini tanlash kerak.
