Floresan mikroskoplarning printsipi va strukturaviy xususiyatlari
Floresan yorug'lik manbai, odatda, turli to'lqin uzunliklarida yorug'lik chiqaradigan o'ta yuqori bosimli simob chiroqni (50-200 Vt) ishlatadi. Biroq, har bir lyuminestsent modda kuchli floresan hosil qiluvchi o'ziga xos qo'zg'atuvchi to'lqin uzunligiga ega. Shu sababli, qo'zg'atuvchi filtr (odatda ultrabinafsha, binafsha, ko'k va yashil turlarda mavjud) faqat ma'lum bir to'lqin uzunlikdagi qo'zg'atuvchi yorug'likdan o'tishi va namunadan nurlanishi va boshqa barcha to'lqin uzunliklarini o'zlashtirishi uchun talab qilinadi.
Qo'zg'atuvchi yorug'lik bilan nurlantirilganda, har bir modda juda qisqa vaqt ichida qo'zg'atuvchi yorug'likdan ko'ra ko'proq to'lqin uzunligi bilan ko'rinadigan flüoresans chiqaradi. Floresans juda o'ziga xosdir va odatda qo'zg'atuvchi nurga qaraganda zaifroq. Ushbu o'ziga xos floresansni kuzatish uchun ob'ektiv linzalari orqasida to'siq (yoki bostirish) filtri o'rnatilishi kerak. U ikkita maqsadga xizmat qiladi: birinchidan, floresansni kuzatishga xalaqit bermaslik va ko'zlarga zarar yetkazmaslik uchun qo'zg'atuvchi nurni ko'zoynakga kirishini o'zlashtiradi va bloklaydi; ikkinchidan, aniq lyuminestsent rang hosil qilish uchun o'ziga xos floresansni tanlab o'tkazadi. Ikki turdagi filtrlar tanlanishi va mos keladigan juftlikda ishlatilishi kerak.
Floresan mikroskoplari optik yo'liga qarab ikki turga bo'linadi:
1. O'tkazuvchan nurli lyuminestsent mikroskop
Ushbu dizaynda qo'zg'atuvchi yorug'lik manbai floresansni qo'zg'atish uchun kondensator va namuna materialidan o'tadi. Qorong'i maydon kondensatori odatda ishlatiladi, ammo standart kondanser ham qo'llanilishi mumkin; aks ettiruvchi oyna qo'zg'atuvchi nurni namunaga yo'naltirish va yon tomonga nurlantirish uchun o'rnatiladi. Bu floresan mikroskopning nisbatan qadimgi turi. Uning afzalligi past kattalashtirishda kuchli lyuminestsentdir, uning kamchiliklari esa kattalashtirish ortishi bilan floresans intensivligining pasayishi hisoblanadi. Shuning uchun u kattaroq namunali materiallarni kuzatish uchun ko'proq mos keladi.
2. Epifloresan mikroskop
Bu flüoresan mikroskopning zamonaviy, yangi ishlab chiqilgan turi. O'tkazilayotgan yorug'lik dizaynidan farqli o'laroq, qo'zg'atuvchi yorug'lik ob'ektiv linzalari orqali namuna yuzasiga pastga yo'naltiriladi - bir xil ob'ektiv linzalar yorug'lik kondensatori va floresan yig'uvchi ob'ektiv bo'lib xizmat qiladi. Optik yo'lda optik o'qga 45 graduslik burchak ostida dikroik nur ajratuvchi o'rnatilgan. Qo'zg'atuvchi yorug'lik ob'ektiv linzada aks etadi va namunaga qaratiladi. Namuna tomonidan hosil qilingan lyuminestsent, ob'ektiv linzalari va qoplamasi sirtlaridan aks ettirilgan qo'zg'atuvchi yorug'lik bilan bir vaqtning o'zida ob'ektiv linzalariga kiradi va qo'zg'atuvchi nurni floresandan ajratib turadigan dikroik nur ajratgichga qaytadi. Qolgan qo'zg'atuvchi yorug'lik keyin to'siq filtri tomonidan so'riladi.
Filtr bloklarini turli xil qo'zg'alish filtri, dikroik nur ajratuvchi va to'siq filtri bilan almashtirish orqali turli xil floresan reaktsiya mahsulotlariga qo'yiladigan talablarni qondirish mumkin. Ushbu turdagi lyuminestsent mikroskopning afzalliklari bir xil maydon yoritilishini, aniq tasvirni va yuqori kattalashtirishda floresan intensivligini oshirishni o'z ichiga oladi.
