Elektron mikroskopiya uchun biologik namunalarni tayyorlash va kuzatish
Mikroskopning aniqligi ishlatiladigan yorug'likning to'lqin uzunligiga bog'liq bo'lib, elektron mikroskop 1933 yilda paydo bo'la boshlagan, yorug'lik manbai sifatida elektron nurning ko'rinadigan nuriga qaraganda ancha qisqa to'lqin uzunligidan foydalanish bilan bog'liq, shuning uchun uning aniqligi optik mikroskopga qaraganda ancha yaxshilanganiga erishish mumkin. Turli xil yorug'lik manbalari elektron mikroskop va optik mikroskop o'rtasidagi bir qator farqlarni ham aniqlaydi.
Elektron nurni tasvirlash printsipidagi farqlarga va namunaning turli yo'llardagi roliga ko'ra, zamonaviy elektron mikroskop bir qator turlarni hosil qilish uchun ishlab chiqilgan bo'lib, hozirgi vaqtda * ko'pincha transmissiya elektron mikroskopi va skanerlash elektronidir. mikroskopda birinchisi 1,000-1,000,000 oʻzgarishlar diapazonining umumiy kattalashtirish oraligʻida boʻlishi mumkin, ikkinchisi { {4}}, 000 orasidagi oʻzgarishlarning umumiy kattalashtirish koʻrsatkichidan. Ushbu tajriba ikki turdagi mikroskoplar, transmissiya elektron mikroskopi va skanerlash elektron mikroskoplari uchun namunalar tayyorlashga qaratilgan.
Materiallar
1. Shtamm ichak tayoqchasi (Ichak tayoqchasi, ichak tayoqchasi) qiya.
2. Eritmalar yoki reagentlar Amil asetat, konsentrlangan sulfat kislota, suvsiz etanol, steril suv, 2% natriy fosfotungstik kislota (pH 6.5-8.0) suvli eritma, 0,3% polivinilformaldegid (triklorometanda erigan) eritmasi, sitoxrom c, ammoniy asetat, plazmid pBR322.
3. Asboblar yoki boshqa jihozlar Oddiy optik mikroskop, mis to'r, chinni voronka, stakan, yassi idish, steril byuretka, steril pinset, lanset, slaydlar, ** hisoblash plitasi, vakuum qoplamasi, tanqidiy nuqta quritgich va boshqalar.
Operatsion bosqichlari
(I) Namuna tayyorlash va transmissiya elektron mikroskopini kuzatish
1. Metall to'rga ishlov berish
Optik mikroskop uchun namunalar kuzatish uchun slaydlarga joylashtiriladi. Biroq, transmissiya elektron mikroskopida, elektronlar shisha varag'iga kira olmaganligi sababli, tashuvchi sifatida faqat to'r materialidan foydalanish mumkin, odatda tashuvchi to'r deb ataladi. Tashuvchi to'r turli materiallar va shakllar tufayli juda ko'p turli spetsifikatsiyalarga bo'linishi mumkin, ulardan * odatda ishlatiladigan 200-400 to'r (teshiklar soni) mis to'r. Mis to'rni ishlatishdan oldin uni axloqsizlikdan tozalash va uni toza saqlash uchun ishlov berish kerak, aks holda bu qo'llab-quvvatlovchi plyonkaning sifatiga va namunali fotosuratlarning ravshanligiga ta'sir qiladi. Ushbu tajribada ishlatiladigan mis to'r 400 mesh bo'lib, uni quyidagi usulda davolash mumkin: birinchi navbatda, uni bir necha soat davomida amil asetat bilan oqartiring, so'ngra uni bir necha marta distillangan suv bilan yuving va keyin suvsiz etanolda oqartiring. suvsizlanish. Agar yuqoridagi usul bo'yicha mis to'r hali ham toza bo'lmasa, uni 1 ~ 2 daqiqaga botirilgan konsentrlangan sulfat kislotani (1: 1) suyultirish uchun yoki bir necha daqiqa davomida qaynatilgan 1% NaOH eritmasida distillangan suv bilan bir necha marta chayqash uchun ishlatilishi mumkin. , foydalanish uchun suvsiz etanol dehidratsiyasiga joylashtirilgan.
2. Yordamchi filmni tayyorlash
Namuna kuzatishda, tashuvchi tarmoqda ham tuzilmagan, bir xil plyonka qatlami bilan qoplangan bo'lishi kerak, aks holda kichik namunalar tashuvchi tarmoqdagi teshiklardan oqib chiqadi, plyonkaning bu qatlami odatda qo'llab-quvvatlovchi plyonka yoki tashuvchi plyonka deb ataladi. Qo'llab-quvvatlash plyonkasi elektronlar uchun shaffof bo'lishi kerak va uning qalinligi odatda 20nm dan kam bo'lishi kerak; elektron nurning ta'siri ostida kino ham ma'lum darajada mexanik kuchga ega bo'lishi kerak, strukturaning barqarorligini saqlab turishi va yaxshi issiqlik o'tkazuvchanligiga ega bo'lishi kerak; Bundan tashqari, qo'llab-quvvatlash tarmog'i elektron mikroskop ostida ko'rinadigan tuzilishga ega bo'lmasligi va olib borilgan namuna bilan kimyoviy reaktsiyaga ega bo'lmasligi va namunani kuzatishga xalaqit bermasligi kerak va uning qalinligi odatda taxminan 15 nm. Qo'llab-quvvatlash plyonkasi plastik plyonkadan (masalan, yong'inga qarshi paxta plyonkasi, polietilen formaldegid plyonkasi va boshqalar), uglerod plyonkasidan yoki metall plyonkadan (masalan, berilliy plyonka va boshqalar) tayyorlanishi mumkin. Muntazam ish sharoitida talablar plastik plyonka bilan bajarilishi mumkin, shu bilan birga, yong'inga qarshi paxta yopishtiruvchi plyonkada plastik plyonka tayyorlash nisbatan oson, lekin kuch polietilen formaldegid plyonkasi kabi kuchli emas.
