Elektron mikroskopiya uchun biologik namunalarni tayyorlash va kuzatish
Mikroskopning aniqligi ishlatiladigan yorug'likning to'lqin uzunligiga bog'liq. 1933 yilda paydo bo'la boshlagan elektron mikroskop yorug'lik manbai sifatida to'lqin uzunligi ko'rinadigan yorug'likdan ancha qisqa bo'lgan elektron nurdan foydalanadi, shuning uchun u erisha oladigan aniqlik optik mikroskopnikiga nisbatan ancha yaxshilanadi. Yorug'lik manbalaridagi farq elektron mikroskoplar va optik mikroskoplar o'rtasidagi bir qator farqlarni ham aniqlaydi.
Elektron nurli tasvirlash printsiplaridagi farqlarga va namunalarga ta'sir qilishning turli usullariga ko'ra, zamonaviy elektron mikroskoplar ko'plab turlarga aylandi. Hozirgi vaqtda eng ko'p qo'llaniladigan elektron mikroskoplar va skanerlash elektron mikroskoplari. Birinchisining umumiy kattalashtirishi 1000-1000000 orasida boʻlishi mumkin. Ikkinchisining umumiy kattalashtirishi 20 va 300,000 marta oʻzgarishi mumkin. Ushbu tajriba asosan ikki turdagi mikroskop namunalarini, transmissiya elektron mikroskopini va skanerlash elektron mikroskopini tayyorlashni joriy qiladi.
2. Uskunalar
1. Bakteriyalar ichak tayoqchasi (Escherichia coli) qiya.
2. Eritma yoki reagent amil asetat, konsentrlangan sulfat kislota, mutlaq etanol, steril suv, 2% natriy fosfotungstat (pH 6.5-8.0) suvli eritma, 0,3% polietilen formaldegid (xloroformda eriydi) eritmasi, hujayralar Pigment c, ammoniy asetat, plazmid pBR322.
3. Asboblar yoki boshqa idishlar: oddiy optik mikroskop, mis to'r, chinni voronka, stakan, idish, steril tomizgich, steril pinset, pin, slaydlar, hisoblash taxtasi, vakuumli qoplama mashinasi, tanqidiy nuqta quritgich va boshqalar.
3. Operatsion bosqichlari
(1) Transmissiya elektron mikroskopi uchun namuna tayyorlash va kuzatish
1. Metall to'rga ishlov berish
Optik mikroskop uchun namuna kuzatish uchun shisha slaydga joylashtiriladi. Biroq, transmissiya elektron mikroskopida, elektronlar shisha qatlamga kira olmasligi sababli, to'r materiallari faqat tashuvchi sifatida ishlatilishi mumkin, odatda tashuvchi tarmoqlar deb ataladi. Tashuvchi to'r turli materiallar va shakllar tufayli juda ko'p turli xil xususiyatlarga bo'linishi mumkin, ular orasida eng ko'p ishlatiladigan 200-400 to'r (teshiklar soni) mis to'r. Mis to'rni axloqsizlikdan tozalash va uni toza saqlash uchun ishlatishdan oldin ishlov berish kerak, aks holda bu qo'llab-quvvatlovchi filmning sifatiga va namunali fotosuratlarning ravshanligiga ta'sir qiladi. Bu tajribada quyidagi tarzda ishlov berilishi mumkin boʻlgan 400-toʻrli mis toʻrdan foydalaniladi: avval uni bir necha soat davomida amil asetat bilan namlang va oqartiring, soʻng uni bir necha marta distillangan suv bilan yuving, soʻngra mutlaq etanolda namlang. suvsizlanish. Agar yuqoridagi usullardan keyin mis to'r hali ham toza bo'lmasa, uni suyultirilgan konsentrlangan sulfat kislotada (1:1) 1-2 daqiqa davomida namlash yoki 1% NaOH eritmasida bir necha daqiqa qaynatish, distillangan suv bilan yuvish mumkin. bir necha marta suv bilan sug'orib, so'ng uni suvsiz etanoldagi dehidratga soling va bir chetga qo'ying.
2. Qo'llab-quvvatlovchi membranani tayyorlash
Namunalarni kuzatishda tashuvchi tarmoq ham tuzilmagan, bir xil plyonka qatlami bilan qoplangan bo'lishi kerak, aks holda kichik namunalar tashuvchi to'rning teshiklaridan oqib chiqadi. Ushbu film odatda qo'llab-quvvatlovchi film yoki tashuvchi film deb ataladi. Qo'llab-quvvatlash plyonkasi elektron shaffof bo'lishi kerak va uning qalinligi odatda 20nm dan kam bo'lishi kerak; elektron nurning ta'siri ostida, plyonka ham strukturaviy barqarorlikni saqlab turish va yaxshi issiqlik o'tkazuvchanligiga ega bo'lishi uchun ma'lum bir mexanik kuchga ega bo'lishi kerak; bundan tashqari, qo'llab-quvvatlash tarmog'i elektron mikroskopda qo'llanilishi kerak ostida ko'rinadigan tuzilish bo'lmasligi kerak, olib borilayotgan namuna bilan kimyoviy reaktsiya va namunani kuzatishga hech qanday aralashmaslik kerak. Uning qalinligi odatda taxminan 15 nm. Qo'llab-quvvatlovchi plyonka plastik plyonka (masalan, kollodion plyonka, polietilen formaldegid plyonkasi va boshqalar), uglerod plyonkasi yoki metall plyonka (masalan, berilyum plyonkasi va boshqalar) bo'lishi mumkin. Oddiy ish sharoitida plastik plyonka talablarga javob berishi mumkin. Plastmassa plyonkalar orasida kollodion plyonkani tayyorlash nisbatan oson, ammo uning kuchi polietilen formaldegid plyonkasi kabi yaxshi emas.
