Elektron mikroskoplar uchun biologik namunalarni tayyorlash va kuzatish
Mikroskopning aniqligi ishlatiladigan yorug'likning to'lqin uzunligiga bog'liq. 1933 yilda paydo bo'lgan elektron mikroskop yorug'lik manbalari sifatida to'lqin uzunliklari ko'rinadigan yorug'likdan ancha qisqaroq bo'lgan elektron nurlardan foydalanish tufayli optik mikroskopga qaraganda sezilarli darajada yuqori aniqlikka erishdi. Turli yorug'lik manbalari elektron mikroskoplar va optik mikroskoplar o'rtasidagi bir qator farqlarni ham aniqlaydi.
Elektron nurli tasvirlash tamoyillari va ularning namunalarga ta'sir qilish usullaridagi farqlarga asoslanib, zamonaviy elektron mikroskoplar ko'plab turlarga aylandi. Hozirgi vaqtda eng ko'p qo'llaniladigan elektron mikroskoplar va skanerlash elektron mikroskoplari. Birinchisi 1000-10000000 marta o'zgarishi mumkin bo'lgan umumiy kattalashtirishga ega, ikkinchisi esa 20-300000 marta o'zgarishi mumkin bo'lgan umumiy kattalashtirishga ega. Ushbu tajriba asosan ikki turdagi mikroskop namunalarini, transmissiya elektron mikroskopiya va skanerlash elektron mikroskopiyasini tayyorlashni joriy qiladi.
2, Uskunalar
1. Escherichia coli shtammi moyil.
2. Eritma yoki reaktiv: pentilatsetat, konsentrlangan sulfat kislota, suvsiz etanol, steril suv, 2% natriy fosfotungstat (pH 6,5-8,0) suvli eritmasi, 0,3% li polivinilformaldegid (xloroformda erigan) , ammoniy 3-aks.BR, ammiak2 p.2.
3. Asboblar yoki boshqa asboblarga oddiy optik mikroskoplar, mis to'rlar, chinni voronkalar, stakanlar, petri idishlari, steril tomchilar, steril pinsetlar, pinlar, shisha slaydlar, hisoblash plitalari, vakuumli qoplama mashinalari, kritik nuqta quritgichlari va boshqalar kiradi.
3, Operatsion bosqichlari
(1) Transmissiya elektron mikroskopi uchun namunalarni tayyorlash va kuzatish
1. Metall to'rga ishlov berish
Optik mikroskopning namunasi kuzatish uchun shisha slaydga joylashtiriladi. Biroq, uzatish oynasida, elektronlar shisha varag'iga kira olmaganligi sababli, to'r materiali faqat tashuvchi sifatida ishlatilishi mumkin, odatda tashuvchi to'r deb ataladi. Tashuvchi to'r turli materiallar va shakllar tufayli turli xil spetsifikatsiyalarga bo'linishi mumkin, ular orasida 200-400 mesh (teshiklar soni) bo'lgan mis to'r ko'pincha ishlatiladi. Mis to'rni ishlatishdan oldin har qanday axloqsizlikni olib tashlash va uni toza saqlash uchun ishlov berish kerak, aks holda bu qo'llab-quvvatlovchi plyonkaning sifatiga va namunali fotosuratlarning ravshanligiga ta'sir qiladi. Ushbu tajribada ishlatiladigan 400 mash mis to'rni quyidagi usul bilan davolash mumkin: birinchi navbatda, pentil asetat bilan bir necha soat davomida namlang va suzing, so'ngra distillangan suv bilan bir necha marta yuving va nihoyat suvsizlanish uchun mis to'rni suvsiz etanolga botiring va suzing. Agar yuqoridagi usullardan keyin mis to'r hali ham toza bo'lmasa, uni suyultirilgan konsentrlangan sulfat kislotada (1:1) 1-2 daqiqa davomida namlash yoki 1% NaOH eritmasida bir necha daqiqa qaynatish, distillangan suv bilan bir necha marta chayish va keyin foydalanish uchun suvsiz etanolda suvsizlantirish mumkin.
