Mikroskopik tasvirlash sinfi. Keng maydonli floresan mikroskop
Hujayrani jonli tasvirlash dasturlarida keng maydonli floresan mikroskopiya mikroskop bosqichida joylashtirilgan muayyan atrof-muhit kameralarida o'stirilgan yopishgan hujayralar dinamikasini kuzatishni osonlashtiradi. O'zining eng asosiy konfiguratsiyasida EPI lyuminestsent yoritgichi bilan jihozlangan standart teskari to'qima madaniyati mikroskopi hududiy massiv detektori tizimi (odatda CCD kamera), mos flüoresan filtrlar va hujayralarning zararli qo'zg'alish nuriga haddan tashqari ta'sirini cheklash uchun o'chirish tizimi bilan birlashtirilgan. . Asosiy lyuminestsent mikroskopiya yorug'lik va chiqarilgan yorug'likni aniqlash uchun maxsus tarmoqli kengligi tanlash uchun diqqat bilan moslashtirilgan interferentsiya filtrlariga tayanadi. Yorug'lik manbalariga simob, ksenon va metall galoidli yoy lampalar, nurni kengaytiruvchi lazer tizimlari va yorug'lik chiqaradigan diodlar (LED) kiradi, ularning barchasi turli xil filtr xususiyatlarini talab qiladi. Floresan mikroskopiyada ishlatiladigan sintetik floroforlar ultrabinafsha, ko'rinadigan va yaqin infraqizil hududlarni qamrab oluvchi emissiya spektrlariga ega. Genetik jihatdan kodlangan lyuminestsent oqsillardan foydalanish jonli hujayralarni ko'rishda floresan mikroskopiya imkoniyatlarini sezilarli darajada kengaytirdi, bu esa tadqiqotchilarga qiziqish uyg'otadigan subhujayra hududlarini aniq belgilash imkonini berdi.
Nuohai LS 18, Nuohai tomonidan mustaqil ravishda ishlab chiqilgan yangi turdagi yorug'likli yorug'lik mikroskopi, shaffof yirik to'qimalar namunalarini yuqori aniqlikdagi 3D tasvirlash uchun maxsus mo'ljallangan va miya, taloq, ingichka ichak kabi turli buzilmagan to'qimalarni o'rganishga bag'ishlangan. , buyrak, o'pka, yurak va o'simta. Organlarning 3D aniq tuzilishi.
Keng maydonli floresansda mikroskop ob'ektiv tomonidan to'plangan to'liq diafragma emissiyasi kerakli ta'sir qilish vaqtini minimallashtirgan holda yozib olingan signalni maksimal darajada oshiradi. Shunday qilib, namunalarni juda qisqa yorug'lik davrlari bilan tasvirlash mumkin. Keng maydonli tasvirlashning asosiy kamchiligi shundaki, fokus tekisligidan uzoq bo'lgan hududlardan flüoresans, shuningdek, fon signali ko'pincha qiziqish xususiyatlarini yashiradigan kiruvchi yorug'likdir. Shuning uchun, keng maydonli tasvirlar, qiziqishning xususiyatlari katta (masalan, organellalar) yoki tabiatda yuqori nuqtali bo'lsa, eng yaxshi natijalarni beradi. Keng maydonli lyuminestsent ko'rish uchun ideal nomzodlar, shu jumladan yopishgan hujayralar, bakteriyalar, xamirturushlar va juda nozik to'qimalar bo'laklari kabi turli xil jonli hujayra namunalari, ammo yanada ilg'or usulda tasvirlashda qalinroq to'qimalar (5 mikrondan ortiq) yaxshi qo'llaniladi.
Sintetik lyuminestsent bo'yoqlar, kvant nuqtalari va lyuminestsent oqsillar bilan lyuminestsent tasvirlashda ko'plab yutuqlar mavjud bo'lsa-da, ba'zi hollarda floresanni boshqa tasvirlash usullari bilan birlashtirish foydali bo'ladi. Misol tariqasida, DIC keng maydonli floresans bilan birgalikda hujayraning hayotiyligi va umumiy morfologiyasini kuzatishda, aniq belgilangan maqsadlar uchun qiziqish hodisalarini o'rganishda ishlatilishi mumkin. Bitta rasmda DIC va floresansni olish odatda amaliy emas, ammo to'g'ri tuzilgan mikroskopda ikkita usul ketma-ket ishlatilishi mumkin. Shunday qilib, epifluoresans rejimida tasvirlangandan so'ng, DIC tasvirlarini o'tkazilgan yorug'lik yordamida floresan etiketli namunalardan olish mumkin. Tahlildan keyingi ikki rasmni birlashtirish mumkin. Bir vaqtning o'zida DIC va lyuminestsent tasvirlarni olish spektral ajratilgan yorug'lik (masalan, ko'rinadigan va yaqin infraqizil) va ikki kamerali yoki split-view kamera adapterlari yordamida rivojlangan keng maydonli mikroskop konfiguratsiyalarida mumkin. Ko'pgina lazerli skanerlash konfokal mikroskoplarida tasvirlarni bir vaqtning o'zida floresan va DIC rejimlarida olish mumkin, bu esa sotib olingandan keyingi ishlov berish zaruratini yo'q qiladi. Fazali kontrast va Hoffman modulyatsiyasi kontrasti keng maydonli floresan mikroskop bilan birgalikda ishlatilishi mumkin. Biroq, bu usullarda ob'ektiv linzalari o'ziga xosdir, u fazali halqa yoki Hoffman modulyatsiya plitasi bo'ladimi, u emissiya intensivligini 5-15 foizga yo'qotishiga olib keladi.
Maqola havolasi: Asbob uskunalari tarmogʻi https://www.instrumentsinfo.com/technology/show-1123.html
