Lazerli konfokal mikroskopning xususiyatlari va qo'llanilishi
Oddiy mikroskopda kuzatuvning tasvir tekisligi qo'shni eksenel tekisliklardan ob'ektiv linzaning fokus tekisligini detektor bilan qoplash orqali ajratilgan bo'lsa, konfokal mikroskopda bu izolyatsiyaga namunani diffraktsiyasi cheklangan nuqta bilan yoritish orqali erishiladi. yorug'lik va filtrlovchi adashgan yorug'lik bu izolyatsiyaga erishish va shu tariqa piksellar sonini yaxshilash uchun yorug'likning ushbu nuqtasining konjugat markazida to'plangan yorug'lik yo'lidagi teshikdan foydalanib.
Faqat konjugat namuna qatlamidan qaytarilgan yorug'lik yig'ish yorug'lik yo'lidagi pin teshigidan o'tishi mumkin, qolgan ahamiyatsiz namunali qatlam ko'zgulari esa igna teshigi tomonidan bloklanadi. Bu piksellar sonini sezilarli darajada oshiradi. Quyida ko'p o'lchovli floresan mikroskopiya va bir xil qalin namunaning konfokal mikroskopiyasini yonma-yon taqqoslash ko'rsatilgan. Turli fokus tekisliklarida bir qator tasvirlar olinganda, odatda "z-stack" deb ataladigan tasvir hosil bo'ladi, bu konfokal mikroskop tomonidan taqdim etilgan piksellar soni va kontrastning o'sishini va bu yutuqlarning asosiy sabablarini ko'rsatadi. Ko'rinib turibdiki, tasvir tekisligi to'qima ustida joylashgan stekning yuqori qismidagi tasvirni o'rganish floresan tasvirda ko'p miqdorda tarqalgan yorug'likni aniqlaydi, konfokal mikroskop tasviri esa qora rangda ko'rinadi. PSFning eksenel yo'nalishdagi bu kamayishi z-stackning o'rtasida joylashgan optik interfeysda kuzatilgan piksellar sonidagi farqga bevosita yordam beradi.
Optik tilim skanerlash tasviri
Lazerli skanerlash konfokal mikroskopining yana bir xususiyati shundaki, u skanerlash tasvirlash texnikasi hisoblanadi. An'anaviy keng maydonli yoritish texnikasi tasvirni to'g'ridan-to'g'ri yalang'och ko'z yoki detektor bilan olishi uchun butun namunani yoritadi, ammo LSCM namunani skanerlash uchun bir yoki bir nechta yo'naltirilgan yorug'lik nurlaridan foydalanadi, natijada olingan tasvir deyiladi. quyidagi diagrammada ko'rsatilganidek, optik bo'lak. An'anaviy keng maydonli yoritish va lazerli skanerlash konfokal yoritish o'rtasidagi farq quyida ko'rsatilgan.
Shuning uchun zamonaviy konfokal mikroskopiyaning amaliy usuli quyidagi rasmda ko'rsatilgan. Lazerning qo'zg'atuvchi nuri dixroik oynadan o'tkaziladi va namunaning x va y yo'nalishidagi bir juft galvanometr ko'zgu orqali skanerdan o'tkaziladi va namunaning qo'zg'atilishi (yoki aks etishi) pin teshigi orqali PMT ga o'tadi. detektor yozib olinadi va yozib olingan skanerlangan tasvir namunaning haqiqiy tasvirini yaratish uchun kompyuter tomonidan qayta tiklanadi.
