Floresan mikroskopiyaga kirish
Floresan mikroskopiyasi floresan bilan bo'yalgan ob'ektni qisqa to'lqinli yorug'lik bilan nurlantirishdir, shunda u uzoq to'lqinli floresan hosil qilish uchun hayajonlanadi va keyin kuzatiladi. Floresan mikroskopida floresan hosil qilish uchun namunaning yorug'lik nuridan ma'lum bir to'lqin uzunligining qo'zg'atuvchi nuri tanlanishi kerak, so'ngra floresansni kuzatish uchun qo'zg'atuvchi yorug'lik va floresansning aralash nuridan ajratish kerak. Shuning uchun filtr tizimi ma'lum bir to'lqin uzunligini tanlashda juda muhim rol o'ynaydi. Floresan mikroskoplari biologiya, tibbiyot va boshqa sohalarda keng qo'llaniladi.
1. Flüoresan mikroskopning asosiy komponentlari:
(A) Yorug'lik manbai: yorug'lik manbai turli to'lqin uzunlikdagi yorug'likni chiqaradi (ultrabinafshadan infraqizilgacha). the
(B) Qo'zg'alish filtri yorug'lik manbai: hayajonli lyuminestsent uchun foydasiz bo'lgan yorug'likni blokirovka qilish bilan birga, namunaning floresan hosil bo'lishiga olib kelishi mumkin bo'lgan ma'lum bir to'lqin uzunligi nuri orqali. the
(C) Floresan namunalari: odatda lyuminestsent pigmentlar bilan bo'yalgan. the
(D) Bloklash filtri: namuna tomonidan so'rilmaydigan qo'zg'atuvchi nurni to'sib qo'ying va floresansni tanlab o'tkazing va ba'zi to'lqin uzunliklari floresansda tanlab uzatiladi.
ning
2. Flüoresan mikroskoplarning tasnifi:
Floresan mikroskoplari odatda ikki turga bo'linadi: transmissiya va epi-emissiya:
a. O'tkazish turi: qo'zg'atuvchi yorug'lik tekshiriladigan ob'ektning pastki qismidan keladi va kondanser qorong'i maydon kondensatoridir, shuning uchun qo'zg'atuvchi yorug'lik ob'ektiv linzaga kirmaydi, lekin floresan ob'ektiv linzaga kiradi. U past kattalashtirishda yorqin, lekin yuqori kattalashtirishda qorong'i. Yog 'immersion va markazlashtirishda ishlash qiyin. Past kattalashtirishda yorug'lik diapazonini aniqlash ayniqsa qiyin, lekin u juda qorong'i ko'rish maydonini olishi mumkin. Transmissiya turi shaffof bo'lmagan ob'ektlar uchun ishlatilmaydi. the
b. Epi-turi: Hozirgi vaqtda uzatish turi deyarli yo'q qilingan. Yangi floresan mikroskoplarning aksariyati epi-tipli. Yorug'lik manbai tekshiriladigan ob'ektning yuqorisidan keladi va optik yo'lda nurni ajratuvchi mavjud, shuning uchun ham shaffof, ham shaffof bo'lmagan ob'ektlarni tekshirish uchun javob beradi. Ob'ektiv linzalar kondensator linzalari vazifasini o'taganligi sababli, uni ishlatish oson emas, balki butun ko'rish maydonini past kattalashtirishdan yuqori kattalashtirishgacha bir xilda yoritishga erishish mumkin. the
ning
3. Floroskopiya uchun ehtiyot choralari
a. Qo'zg'atuvchi yorug'likning uzoq muddatli nurlanishi floresansning susayishi va so'nishiga olib keladi, shuning uchun kuzatish vaqtini iloji boricha qisqartiring va vaqtincha kuzatilmaganda qo'zg'atuvchi nurni yopish uchun to'siqdan foydalaning. the
b. Yog 'yog'li linzalar bilan kuzatayotganda, "lyuminestsent bo'lmagan moy" dan foydalaning. the
c. Floresan deyarli har doim zaif va qorong'i xonada o'tkazilishi kerak. the
d. Elektr ta'minotida kuchlanish stabilizatorini o'rnatish eng yaxshisidir, aks holda beqaror kuchlanish nafaqat simob chiroqning ishlash muddatini qisqartiradi, balki mikroskopni tekshirish ta'siriga ham ta'sir qiladi. the
the
4. Floresan mikroskopiyadan foydalanish
1. Floresan mikroskop namunalarini tayyorlash talablari
a. Shisha slayd
Shisha slaydning qalinligi 0,8 va 1,2 mm orasida bo'lishi kerak. Juda qalin slayd bir tomondan ko'proq yorug'likni o'zlashtiradi, ikkinchi tomondan, qo'zg'atuvchi nurni namunaga to'plash mumkin emas. Slaydlar silliq, qalinligi bir xil bo'lishi va aniq avtoflüoresansdan xoli bo'lishi kerak. Ba'zan kvarts shisha slaydlari ishlatiladi. the
b. Qopqoq oyna
Qopqoq oynasining qalinligi taxminan 0.17 mm, silliq. Qo'zg'atuvchi yorug'likni kuchaytirish uchun quruq qopqoq oynasi ham ishlatilishi mumkin, bu turli xil to'lqin uzunlikdagi yorug'likka turli interferentsiya ta'siriga ega bo'lgan bir necha qatlamli moddalar (masalan, magniy ftorid) bilan qoplangan maxsus qopqoq oynasi bo'lib, bu yorug'lik nuriga ta'sir qilishi mumkin. floresans muammosiz ketadi. Qo'zg'alish nuri o'tadi va aks ettirilgan qo'zg'alish nuri namunani qo'zg'atadi. the
c. Namuna
To'qimalarining bo'laklari yoki boshqa namunalar juda qalin bo'lmasligi kerak. Agar u juda qalin bo'lsa, qo'zg'atuvchi nurning katta qismi namunaning pastki qismida iste'mol qilinadi, ob'ektiv linzalar tomonidan bevosita kuzatilgan yuqori qism esa to'liq qo'zg'almaydi. Bundan tashqari, hujayraning bir-birining ustiga chiqishi yoki iflosliklar qoplanadi, bu hukmga ta'sir qiladi. the
d. O'rnatish agenti
Glitserin odatda o'rnatish vositasi sifatida ishlatiladi, u avtoflüoresan bo'lmasligi kerak, rangsiz va shaffof bo'lishi kerak va flüoresansning yorqinligi pH 8.5-9.5 da yorqinroq bo'ladi va tezda so'nishi oson emas. Shuning uchun, pH 9.0 dan 9,5 gacha bo'lgan glitserin va 0.5mol/L karbonat tampon eritmasining teng aralashmasi odatda o'rnatish vositasi sifatida ishlatiladi. the
e. oyna yog'i
Odatda, qorong'u maydon floresan mikroskoplari va moyga botirish maqsadlari bilan namunalarni kuzatishda immersion moydan foydalanish kerak. Yuqorida aytib o'tilgan glitserin bilan almashtirilishi mumkin bo'lgan maxsus lyuminestsent bo'lmagan oyna yog'ini ishlatish eng yaxshisidir va suyuq kerosin ham ishlatilishi mumkin, ammo sinishi ko'rsatkichi past, bu tasvir sifatiga biroz ta'sir qiladi.
