Siz uchun to'g'ri konfokal mikroskopni qanday tanlash mumkin? Muayyan usul bormi?
Konfokal mikroskopiya keng maydon mikroskopiga qaraganda ko'proq afzalliklarga ega. Konfokal mikroskop namunalarning uzluksiz optik kesilishini amalga oshirishi va fokal bo'lmagan tekisliklardan signal shovqinlarini istisno qilishi mumkin. Shu sababli, konfokal mikroskopiyani qo'llash haqiqatan ham keng tarqalgan. Biroq, bozorda tobora ko'proq konfokal mikroskoplar mavjud. Qanday tanlash kerak?
Konfokal mikroskopiya keng maydon mikroskopiga qaraganda ko'proq afzalliklarga ega. Konfokal mikroskop namunalarning uzluksiz optik qismlarini yaratishi va fokal bo'lmagan tekisliklardan signal shovqinlarini istisno qilishi mumkin. Shu sababli, konfokal mikroskopiya haqiqatan ham keng tarqalgan. Biroq, bozorda tobora ko'proq konfokal mikroskoplar mavjud. Qanday tanlash kerak? Konfokal mikroskopni tanlashda ikkita asosiy va muhim fikr mavjud: siz o'rganmoqchi bo'lgan namuna turi (masalan, qo'zg'almas yoki jonli hujayralar) va siz o'tkazmoqchi bo'lgan tahlil turi (masalan, statik yoki dinamik hujayra jarayonlari).
Ruxsat etilgan hujayralarni konfokal tasvirlash
Ruxsat etilgan va bo'yalgan hujayralar yoki to'qimalarni tasvirlash uchun biz odatda lazerli skanerlash konfokalini (LSCM) tanlaymiz. Bu, asosan, qattiq o'lik hujayralar jonli hujayralardagi tez biologik hodisalarga ega emasligi va LSCMning yuqori fazoviy o'lchamlaridan yaxshiroq foyda olishlari bilan bog'liq. LSCM tasviri namunani lazer yordamida optik tarzda kesishdir va skanerlash tezligi (skanerlash massivi oynasining tezligiga qarab) odatda 1 kadr / s ni tashkil qiladi. Uzoqroq ta'sir qilish vaqtlari fotosuratlarni oqartirish xavfini oshiradi, ammo o'lik hujayralar uchun vaqt muhim emas va biz uni bir nechta suratga olish orqali o'rtacha hisoblashimiz mumkin.
Jonli hujayralarni konfokal tasvirlash
Jonli hujayralarni tasvirlash noqulay muhitlardan qo'shimcha himoya talab qiladi. Tasvirlashda biz birinchi navbatda hujayra hayotiyligi va sog'lig'ini saqlashimiz kerak. Doimiy haroratli isitish elementlari va perfuzion tizimlar, ayniqsa vaqt oralig'idagi tadqiqotlar uchun juda muhimdir. Tirik hujayralarning fiziologik holatini boshqaradigan tez biokimyoviy hodisalar ko'pchilik o'rganmoqchi bo'lgan narsadir, ammo bu hodisalar an'anaviy LSCM uchun juda tezdir. Bundan tashqari, LSCM ga uzoq vaqt ta'sir qilish ham hujayralarga toksik nurning shikastlanishiga olib keldi. Shuning uchun tirik hujayralarni tasvirlash uchun maxsus konfokal mikroskoplar kerak bo'ladi.
Tirik hujayralarni konfokal tasvirlash uchun odatda ikkita variant mavjud: tez skanerlash lazerli konfokallarni skanerlash va aylanuvchi disk konfokallarini. Tez skanerlovchi konfokal mikroskop sekinroq galvanometr oynalarini tezroq rezonansli skanerlash oynalari bilan almashtirib, skanerlash tezligini sekundiga 30 kadrgacha oshirish imkonini beradi; aylanuvchi disk konfokallari (SDCM) tezroq skanerlashning afzalligiga ega (garchi fazoviy o'lchamlari muqarrar ravishda yo'qolsa ham), uning tezligi nazariy jihatdan 2000 kadr / s ga yetishi mumkin (amalda u ko'pincha boshqa omillar bilan cheklanadi).
Agar siz fotosuratni oqartirish yoki juda zaif floresan signalidan xavotirda bo'lsangiz, SDCM ko'proq mos kelishi mumkin. SDCM qo'zg'atuvchi yorug'likni tarqatish uchun joylashtirilgan mikro quduqli ikkita aylanadigan diskdan foydalanadi. Namuna joyini skanerdan o'tkazadigan LSCM dan farqli o'laroq, SDCM bir vaqtning o'zida bir nechta nuqtalarni oladi (taxminan 100 pikselli nuqta), shuning uchun tezlik sezilarli darajada oshadi va SDCMning fotooqartilishi va kamroq fototoksiklik. Shu bilan birga, skanerlash tezligini oshirish uchun yuqori sezgir detektorlar bilan birgalikda tez skanerlash konfokallaridan ham foydalanishingiz mumkin va an'anaviy konfokallarning boy funktsiyalarini saqlab qolishi mumkin bo'lgan fototoksiklikni kamaytirish uchun qo'zg'atuvchi yorug'lik energiyasini kamaytirishingiz mumkin.
Avtomatlashtirilgan konfokal tasvirlash tizimi
Ba'zi tadqiqotchilar mikroskopni o'zlarining shaxsiy ehtiyojlariga mos ravishda o'zgartirish yo'llarini topishni yaxshi ko'radilar. Ayrim tadqiqotchilar esa mikroskoplarning qanday ishlashi bilan ham qiziqmaydilar. Ikkinchisi uchun avtomatlashtirilgan konfokal mikroskop ularga ko'proq yoqishi mumkin. Masalan, Olympus FluoViewFV10i shunday to'liq avtomatik ish stoli 4-konfokal lazerli mikroskopdir. Uning ixcham integratsiyalashgan tuzilishi deyarli o'rnatish joyini talab qilmaydi. Ushbu turdagi asbob har kuni ko'plab tasvir ma'lumotlarini yig'ish kerak bo'lgan tadqiqotchilar uchun idealdir, lekin, albatta, ular an'anaviy konfokallarning funksionalligi va moslashuvchanligini to'liq aks ettirmaydi. Bundan tashqari, NikonA1 ham to'liq avtomatik konfokal tizimdir. Ko'pgina an'anaviy konfokal skanerlash mikroskoplari singari, NikonA1 galvanometr skanerlash kallagidan foydalanadi, bu gibrid skanerlash boshli A1R-ga qaraganda yuqori aniqlikka ega, lekin tezligi biroz sekinroq (A1R ~ 30 kadr / s)
