Floresan mikroskopiya texnik parametrlari Floresan mikroskopiya texnikasi va usullari
Floresan mikroskopning texnik parametrlari 1. Keng burchakli okulyar 2. Akromatik obyektiv linzasi 3. To‘rt teshikli obyektiv linzalari konvertori 4. Epi-lyuminestsent qurilma Moviy (B) Yashil (G) qo‘zg‘atuvchi tizim 100Vt simob chiroq 5. Koaksiyal qo'pol va nozik fokusni sozlash mexanizmi: sozlash Fokus diapazoni: 15 mm Mikro-harakatli panjara qiymati: 0,002 mm 6. Ikki qavatli mexanik stol Uzunlamasına harakat diapazoni: 70 mm Yanal harakat diapazoni: 50 mm
Floresan mikroskopning texnik parametrlari
1. Keng burchakli okulyar
2. Akromatik obyektiv linzalari
3. To'rt diafragmali burun qismi
4. Epi-flüoresans moslamasi ko'k (B) yashil (G) qo'zg'alish tizimi 100 Vt simob chiroq
5. Koaksial qo'pol va nozik fokusni sozlash mexanizmi: fokus diapazoni 15 mm nozik harakat panjara qiymati 0.002mm
6. Ikki qavatli mexanik dastgoh
Vertikal harakat oralig'i: 70 mm Yanal harakat oralig'i: 50 mm
Floresan mikroskopiya ko'nikmalari va usullari
(1) Shisha slayd
Shisha slaydning qalinligi 0,8 va 1,2 mm orasida bo'lishi kerak. Juda qalin slayd bir tomondan ko'proq yorug'likni o'zlashtiradi, ikkinchi tomondan, qo'zg'atuvchi nurni namunaga to'plash mumkin emas. Slaydlar silliq, qalinligi bir xil bo'lishi va aniq avtoflüoresansdan xoli bo'lishi kerak. Ba'zan kvarts shisha slaydlari ishlatiladi.
(2) Shishani yoping
Qopqoq oynasining qalinligi taxminan 0.17 mm, silliq. Qo'zg'atuvchi yorug'likni kuchaytirish uchun interferentsiyali qopqoq oynasi ham ishlatilishi mumkin, bu turli xil to'lqin uzunlikdagi yorug'likka turli interferentsiya ta'siriga ega bo'lgan bir necha qatlamli moddalar (masalan, magniy ftorid) bilan qoplangan maxsus qopqoq oynasi bo'lib, bu yorug'lik nuriga ta'sir qilishi mumkin. floresans muammosiz ketadi. Qiziqarli yorug'lik o'tadi va aks etadi va bu aks ettirilgan qo'zg'atuvchi nur namunani qo'zg'atadi.
(3) Namuna
To'qimalarining bo'laklari yoki boshqa namunalar juda qalin bo'lmasligi kerak. Agar u juda qalin bo'lsa, qo'zg'atuvchi nurning katta qismi namunaning pastki qismida iste'mol qilinadi, ob'ektiv linzalar tomonidan bevosita kuzatilgan yuqori qism esa to'liq qo'zg'almaydi. Bundan tashqari, hujayra qoplamasi yoki nopoklik qopqog'i, hukmga ta'sir qiladi.
(4) O'rnatish agenti
Glitserin odatda o'rnatish vositasi sifatida ishlatiladi, u avtoflüoresan bo'lmasligi kerak, rangsiz va shaffof bo'lishi kerak va flüoresansning yorqinligi pH 8.5-9.5 da yorqinroq bo'ladi va tezda so'nishi oson emas. Shuning uchun, pH 9.0 dan 9,5 gacha bo'lgan glitserin va 0,5mol/l karbonat tampon eritmasining teng aralashmasi odatda o'rnatish vositasi sifatida ishlatiladi.
(5) oyna moyi
Odatda, qorong'u maydonli floresan mikroskoplar va moyga botirish linzalari bilan namunalarni ko'rishda immersion moydan foydalanish kerak. Maxsus floresan bo'lmagan immersion moydan foydalanish yaxshidir. Buning o'rniga yuqoridagi glitserin ham ishlatilishi mumkin va suyuq kerosin ham ishlatilishi mumkin, ammo sinishi ko'rsatkichi past, bu tasvir sifatiga ozgina ta'sir qiladi. Ta'sir qilish.
Flüoresan mikroskopning printsipi va strukturaviy xususiyatlari
Floresan mikroskopiyasi filtr tizimi orqali ma'lum bir to'lqin uzunligidagi yorug'likni (masalan, ultrabinafsha nur 3650 dyuym yoki binafsha ko'k chiroq 4200 dyuym) chiqarish uchun yuqori yorug'lik samaradorligiga ega nuqtadan foydalanib, namunadagi floresan moddalarni qo'zg'atadi. turli ranglar Shundan so'ng, ob'ektiv linzalari va okulyarning kattalashtirish orqali kuzating. Shu tarzda, kuchli kontrast fonida, hatto floresan juda zaif bo'lsa ham, uni aniqlash oson va yuqori sezuvchanlikka ega. U asosan hujayra tuzilishi va funktsiyasi va kimyoviy tarkibini o'rganish uchun ishlatiladi. Floresan mikroskopning asosiy tuzilishi oddiy optik mikroskop va ba'zi aksessuarlardan (masalan, lyuminestsent yorug'lik manbai, qo'zg'atuvchi filtr, ikki rangli nurni ajratuvchi va blokirovka qiluvchi filtr va boshqalar) iborat. Floresan yorug'lik manbai - odatda har xil to'lqin uzunlikdagi yorug'likni chiqarishi mumkin bo'lgan ultra yuqori bosimli simob chiroqdan (50-200 Vt) foydalaning, lekin har bir lyuminestsent moddada eng kuchli floresan hosil qiluvchi qo'zg'atuvchi to'lqin uzunligi mavjud, shuning uchun qo'zg'atuvchi filtr ( Umuman olganda, ultrabinafsha, binafsha, ko'k va yashil qo'zg'atuvchi filtrlar mavjud), ular faqat ma'lum bir to'lqin uzunligidagi qo'zg'atuvchi nurni o'tkazish va namunani nurlantirish, boshqa yorug'likni yutish imkonini beradi. Har bir modda qo'zg'atuvchi yorug'lik bilan nurlantirilgandan so'ng, u juda qisqa vaqt ichida nurlanish to'lqin uzunligidan uzunroq to'lqin uzunligi bilan ko'rinadigan floresansni chiqaradi. Floresans o'ziga xosdir va odatda qo'zg'atuvchi nurdan zaifroq. Muayyan floresansni kuzatish uchun ob'ektiv linzalari orqasida blokirovka (yoki bostirish) qo'shilishi va u bilan birgalikda ishlatilishi kerak.
Floresan mikroskop va oddiy mikroskop o'rtasidagi farq
1. Yoritish usuli odatda episkopikdir, ya'ni yorug'lik manbai ob'ektiv linzalar orqali namunaga proyeksiyalanadi;
2. Yorug'lik manbai ultrabinafsha nurlar, to'lqin uzunligi qisqaroq va o'lchamlari oddiy mikroskoplarga qaraganda yuqori;
3. Ikkita maxsus filtr mavjud bo'lib, yorug'lik manbai oldidagisi ko'rinadigan yorug'likni filtrlash uchun ishlatiladi va inson ko'zini himoya qilish uchun okulyar va ob'ektiv linzalari ultrabinafsha nurlarini filtrlash uchun ishlatiladi.
Floresan mikroskop ham optik mikroskopning bir turi bo'lib, asosiy farq shundaki, ikkalasining qo'zg'alish to'lqin uzunligi boshqacha. Bu flüoresan mikroskop va oddiy optik mikroskop o'rtasidagi struktura va foydalanish nuqtai nazaridan farqni aniqlaydi.
Floresan mikroskopiyasi immunofluoresan sitokimyoda muhim vositadir. U yorug'lik manbai, filtr plastinka tizimi va optik tizim kabi asosiy komponentlardan iborat. Flüoresansni chiqarish uchun namunani qo'zg'atish uchun yorug'likning ma'lum bir to'lqin uzunligidan foydalanish va ob'ektiv linzalar va ko'zoynak tizimini kuchaytirish orqali namunaning floresans tasvirini kuzatish.
