Floresan mikroskopini qo'llash va ishlatish printsipi
(1) Floresan mikroskopning printsipi va strukturaviy xususiyatlari: floresan mikroskop filtr tizimi orqali ma'lum bir to'lqin uzunligidagi yorug'likni (masalan, ultrabinafsha nur 3650 dyuym yoki binafsha ko'k chiroq 4200 dyuym) chiqarish uchun yuqori yorug'lik samaradorligiga ega nuqtali yorug'lik manbasidan foydalanadi. namunani qo'zg'atish uchun qo'zg'atuvchi yorug'lik sifatida. Ichidagi lyuminestsent modda turli rangdagi floresansni chiqargandan so'ng, u ob'ektiv linza va okulyar kattalashtirish orqali kuzatiladi. Shu tarzda, kuchli kontrast fonida, hatto floresan juda zaif bo'lsa ham, uni aniqlash oson va yuqori sezuvchanlikka ega. U asosan hujayra tuzilishi va funktsiyasi va kimyoviy tarkibini o'rganish uchun ishlatiladi. Floresan mikroskopning asosiy tuzilishi oddiy optik mikroskop va ba'zi aksessuarlardan (masalan, lyuminestsent yorug'lik manbai, qo'zg'atuvchi filtr, ikki rangli nur ajratgich va blokirovka filtri va boshqalar) iborat. Floresan yorug'lik manbai - odatda har xil to'lqin uzunlikdagi yorug'likni chiqarishi mumkin bo'lgan ultra yuqori bosimli simob chiroqdan (50-200Vt) foydalaning, lekin har bir lyuminestsent moddada eng kuchli floresan hosil qiluvchi qo'zg'atuvchi to'lqin uzunligi mavjud, shuning uchun qo'zg'atuvchi filtr ( Umuman olganda, ultrabinafsha, binafsha, ko'k va yashil qo'zg'atuvchi filtrlar mavjud), ular faqat ma'lum bir to'lqin uzunligidagi qo'zg'atuvchi nurni o'tkazish va namunani nurlantirish, boshqa yorug'likni yutish imkonini beradi. Har bir modda qo'zg'atuvchi yorug'lik bilan nurlantirilgandan so'ng, u juda qisqa vaqt ichida nurlanish to'lqin uzunligidan uzunroq to'lqin uzunligi bilan ko'rinadigan floresansni chiqaradi. Floresans o'ziga xosdir va odatda qo'zg'atuvchi nurdan zaifroq. Muayyan floresansni kuzatish uchun ob'ektiv linzalari orqasida blokirovka qiluvchi (yoki bostiruvchi) filtr kerak. U ikkita funktsiyaga ega: biri floresansni buzmaslik va ko'zlarga zarar bermaslik uchun qo'zg'atuvchi nurni ko'zoynakga kirishini singdirish va blokirovka qilish; ikkinchisi ma'lum bir floresan rangini ko'rsatib, o'ziga xos floresanni tanlash va o'tkazishga ruxsat berishdir. Ikkala filtrni birgalikda ishlatish kerak.
Optik yo'llari bo'yicha floresan mikroskoplarning ikki turi mavjud:
1. Transmissiya floresan mikroskopi: qo'zg'atuvchi yorug'lik manbai floresansni qo'zg'atish uchun kondensator linzalari orqali namuna materialidan o'tkaziladi. Qorong'i maydon kollektori odatda ishlatiladi va oddiy kollektor ham qo'zg'atuvchi yorug'likni namunaga yo'naltirish va chetlab o'tish uchun oynani sozlash uchun ishlatilishi mumkin. Bu eski floresan mikroskop. Afzalligi shundaki, lyuminestsent past kattalashtirishda kuchli bo'ladi, ammo kamchilik shundaki, floresansning kattalashishi ortishi bilan kamayadi. Shuning uchun kattaroq namunali materiallarni kuzatish yaxshiroqdir.
2. Epi-flüoresan mikroskop hozirgi zamonda yaratilgan yangi turdagi floresan mikroskopdir. Farqi shundaki, qo'zg'atuvchi yorug'lik ob'ektiv linzadan namunaning yuzasiga tushadi, ya'ni bir xil ob'ektiv linzalar yorug'lik kondensatori va floresansni yig'ish uchun ob'ektiv linzalar sifatida ishlatiladi. Engil urandan 45 daraja uzoqda joylashgan yorug'lik yo'liga dikroik nurni ajratuvchi qo'shilishi kerak. Qo'zg'atuvchi yorug'lik ob'ektiv linzada aks ettiriladi va namunaga to'planadi. Namuna tomonidan yaratilgan floresans va ob'ektiv linzalarning linzalari yuzasi va qopqoq oynasi yuzasi tomonidan aks ettirilgan qo'zg'atuvchi yorug'lik bir vaqtning o'zida ob'ektiv linzalariga kiradi va qo'zg'atuvchi nurni floresandan ajratilgan qilish uchun ikki rangli nur ajratgichga qaytadi. , qoldiq qo'zg'atuvchi nur blokirovka qiluvchi filtrlar tomonidan so'riladi. Turli xil qo'zg'atuvchi filtr / ikki rangli nurni ajratuvchi / blokirovka qiluvchi filtr kombinatsiyasiga o'tish kabi turli xil floresan reaktsiya mahsulotlarining ehtiyojlarini qondirishi mumkin. Ushbu turdagi floresan mikroskopning afzalligi shundaki, ko'rish maydonining yoritilishi bir xil, tasvir aniq va kattalashtirish qanchalik katta bo'lsa, flüoresans shunchalik kuchli bo'ladi.
(2) Floresan mikroskopdan qanday foydalanish kerak.
1. Yorug'lik manbasini yoqing va ultra yuqori bosimli simob chiroq eng yorqin nuqtaga erishish uchun bir necha daqiqa qizdirilishi kerak.
2. Transmissiya floresan mikroskopi yorug'lik manbai va kondensator o'rtasida kerakli qo'zg'atuvchi filtrni o'rnatishi va ob'ektiv linzalari orqasida mos keladigan blokirovka filtrini o'rnatishi kerak. Epi-flüoresan mikroskoplar yorug'lik yo'lidagi teshiklarga kerakli qo'zg'atuvchi filtrni/ikki rangli nur ajratgichni/bloklovchi filtrni kiritishi kerak.
3. Kam kattalashtiruvchi linza bilan kuzating va yorug'lik manbasining markazini turli modeldagi floresan mikroskoplarning sozlash moslamasiga ko'ra butun yorug'lik joyining markazida joylashishi uchun sozlang.
4. Namuna qismini joylashtiring va diqqatni qaratgandan keyin kuzating. Foydalanish vaqtida e'tibor berish kerak: ko'zni shikastlamaslik uchun to'g'ridan-to'g'ri oxirgi filtr bilan kuzatmang; yog 'linzalari bilan namunalarni kuzatishda floresansiz maxsus moyli linzalardan foydalanish kerak; yuqori bosimli simob chiroq o'chirilgandan so'ng, uni darhol qayta yoqish mumkin emas, uni sinab ko'rish kerak. 5 daqiqadan so'ng uni qayta ishga tushirish mumkin, aks holda u beqaror bo'ladi va simob chiroqning ishlash muddatiga ta'sir qiladi.
(3) Ko'k-binafsha nur filtri bilan o'qitish platformasida lyuminestsent mikroskop ostida 0,01 foiz akridinli to'q sariq rangli floresan bo'yoq bilan bo'yalgan hujayralarni kuzating. Yadro va sitoplazma ikki xil rangdagi flüoresan (to'q yashil va to'q sariq-qizil) hosil qilish uchun hayajonlanadi.
