Konfokal lazer mikroskopining xususiyatlari va qo'llanilishi
Lazerli skanerlash konfokal mikroskop (LSCM) - bu konjugat fokus texnologiyasiga asoslangan mikroskopning bir turi, ya'ni lazer yorug'lik manbai, sinovdan o'tkazilayotgan namuna va detektor bir-birining konjugat holatida bo'lishi uchun.
Asosiy
Umumiy mikroskoplarda ob'ektiv linzaning fokus tekisligi detektorga to'g'ri keladi, shunda kuzatilgan tasvir tekisligi qo'shni eksenel tekislikdan ajratiladi, konfokal mikroskoplarda esa namuna diffraktsiyasi cheklangan yorug'lik nuqtasi yordamida yoritiladi. Ushbu izolyatsiya effektiga aniqlikni yaxshilash uchun adashgan yorug'likni filtrlash uchun nuqta konjugatining markazlashtirilgan nuqtasida yig'ish yorug'lik yo'lidagi igna teshigidan foydalanish orqali erishiladi.
Tasvirlash xususiyatlari
Faqat konjugatsiyalangan namuna qatlamidan qaytarilgan yorug'lik yig'ish yorug'lik yo'lidagi kichik teshikdan o'tishi mumkin va qolgan ahamiyatsiz namuna qatlamining ko'zgulari kichik teshik tomonidan bloklanadi. Bu rezolyutsiyaning sezilarli darajada oshishiga olib kelishi mumkin. Quyida ko'p o'lchovli floresan mikroskopiya va bir xil qalin namunaning konfokal mikroskopiyasini yonma-yon taqqoslash ko'rsatilgan. Turli fokusli tekisliklarda bir qator tasvirlar olinganda, odatda "z-stack" deb ataladigan narsa yaratilishi mumkin va bu rasm konfokal mikroskop tomonidan taqdim etilgan piksellar soni va kontrastning o'sishini va bu yutuqlarning asosiy sabablarini ko'rsatadi. To'qima ustidagi tasvir tekisligi bilan stekning yuqori qismidagi tasvirni ko'rib chiqish floresan tasvirda juda ko'p tarqalgan yorug'likni aniqlaydi, konfokal tasvir esa qora ko'rinadi. PSFning eksenel yo'nalishdagi bu kamayishi z-stackning o'rtasida joylashgan optik interfeysda kuzatilgan piksellar sonidagi farq uchun bevosita javobgardir.
Lazerli skanerlash konfokal mikroskopining yana bir xususiyati shundaki, u skanerlash tasvirlash texnologiyasidir. An'anaviy keng maydonli yoritish texnologiyasi butun namunani yoritadi, shuning uchun tasvirni to'g'ridan-to'g'ri yalang'och ko'z yoki detektor bilan olish mumkin, lekin LSCM skanerlash va tasvirlash uchun nurdan foydalanadi yoki bir nechta fokuslangan nurlar namunadan o'tadi va natijada olingan tasvir optik qism deb ataladi. Quyida an'anaviy keng maydonli yoritish usuli va lazerli skanerlash konfokal yoritish usuli o'rtasidagi farq ko'rsatilgan.
Shuning uchun zamonaviy konfokal mikroskopning amaliy ish usuli quyidagi rasmda ko'rsatilgan. Lazer chiqaradigan qo'zg'atuvchi yorug'lik dixroik oynadan o'tadi va bir juft tebranish oynalari orqali namunaning x va y yo'nalishlarida skanerdan o'tkazadi. Namunaning qo'zg'alishi (yoki aks etishi) Yorug'lik PMT detektoriga pin teshigi orqali kiradi va yozib olinadi va yozilgan skanerlash tasviri haqiqiy namuna tasvirini olish uchun kompyuter tomonidan qayta tiklanadi.
