Multifotonli lazerli skanerlash mikroskopining afzalliklarini oshirish
Lazerli skanerlash multifotonli mikroskopiya optik mikroskopga nisbatan katta yaxshilanishdir. U tirik hujayralar, sobit hujayralar va to'qimalarning chuqur tuzilishini kuzatishi va aniq va aniq ko'p qatlamli Z-tekis tuzilmalarni, ya'ni optik qismlarni olishi mumkin, ulardan namunaning uch o'lchovli qattiq tuzilishini qurish mumkin. Konfokal mikroskop lazerli yorug'lik manbasidan foydalanadi, u kengaygandan so'ng, ob'ektiv linzaning butun orqa fokus tekisligini to'ldiradi va keyin ob'ektiv linzalarning linzalari tizimidan o'tib, namunaning fokus tekisligida juda kichik nuqtaga yaqinlashadi. Ob'ektivning raqamli diafragmasiga qarab, eng yorqin yoritish nuqtasining diametri taxminan 0,25 ~ 0,8 mkm, chuqurligi esa taxminan 0,5 ~ 1,5 mkm. . Konfokal nuqtaning o'lchami mikroskop dizayniga, lazer to'lqin uzunligiga, ob'ektiv ob'ektiv xususiyatlariga, skanerlash birligi holati sozlamalariga va namunaning xususiyatlariga bog'liq. Dala mikroskopining yorug'lik diapazoni va yorug'lik chuqurligi katta, konfokal mikroskopning yoritilishi esa fokus tekisligidagi aniq fokusga qaratilgan. Konfokal mikroskopiyaning eng asosiy afzalligi shundaki, u qalin lyuminestsent namunalarni (50 mkm yoki undan ko'proqqa yetishi mumkin) nozik optik kesimini amalga oshirishi mumkin va bo'laklarning qalinligi 0,5 dan 1,5 mkm gacha. Optik qismning ketma-ket tasvirlarini murakkab mikroskop Z o'qi step motori yordamida namunani yuqoriga va pastga siljitish orqali olish mumkin. Tasvir ma'lumotlarining to'planishi namunadagi boshqa joylardan chiqadigan signallarga xalaqit bermasdan, aniq tekislikda boshqariladi. Fon floresansining ta'sirini olib tashlaganingizdan va signal-shovqin nisbatini oshirgandan so'ng, konfokal tasvirlarning kontrasti va o'lchamlari an'anaviy dala yoritilgan floresan tasvirlarga nisbatan sezilarli darajada yaxshilanadi. Ko'pgina namunalarda ko'plab murakkab strukturaviy komponentlar murakkab tizimlarni hosil qilish uchun bir-biriga bog'langan, ammo etarli optik qismlar to'plangandan so'ng, biz ularni dasturiy ta'minot orqali uch o'lchamda qayta qurishimiz mumkin. Ushbu eksperimental usul biologik tadqiqotlarda hujayralar yoki to'qimalar o'rtasidagi murakkab strukturaviy va funktsional munosabatlarni yoritishda keng qo'llaniladi.
