Floresan mikroskoplari va oddiy yorug'lik mikroskoplari o'rtasidagi farqlar
Floresan mikroskoplari an'anaviy optik mikroskoplardan farq qiladi. Namunalarni oddiy yorug'lik manbasidan yorug'lik bilan kuzatish o'rniga, ular mikroskop slaydidagi namunadagi lyuminestsent moddalarni qo'zg'atish uchun ma'lum bir to'lqin uzunlikdagi yorug'likdan (odatda ultrabinafsha yoki ko'k-binafsha nur) foydalanadilar va bu moddalar flüoresan nurlanishni keltirib chiqaradi. Shuning uchun floresan mikroskopning yorug'lik manbai to'g'ridan-to'g'ri namunani yoritmaydi; u namunadagi endogen floresan moddalarni qo'zg'atish uchun energiya manbai sifatida ishlaydi. Biz namunani yorug'lik manbasining o'zidan yorug'lik tufayli emas, balki namuna ichidagi lyuminestsent moddalar qo'zg'atuvchi yorug'lik energiyasini o'zlashtirgani va keyin floresans chiqaradiganligi sababli ko'rishimiz mumkin.
Bundan kelib chiqadiki, lyuminestsent mikroskopning asosiy xususiyati shundaki, uning yorug'lik manbai ma'lum bir to'lqin uzunligi diapazonidagi qo'zg'atuvchi nurni ta'minlay oladi, bu tekshirilayotgan namunadagi lyuminestsent moddalarning etarli intensivlikdagi floresansini chiqarishga imkon beradi. Shu bilan birga, floresan mikroskop mos keladigan filtr tizimi bilan jihozlangan bo'lishi kerak. Bu floresan gistokimyosi uchun muhim vositadir. Floresan mikroskop asosan ultra yuqori bosimli yorug'lik manbai, filtr tizimi (shu jumladan qo'zg'atuvchi filtrlar va to'siq filtrlari), optik tizim va fotografik tizimdan iborat. U lyuminestsent moddalarni qo'zg'atish uchun ma'lum bir to'lqin uzunligidagi yorug'lik yordamida ishlaydi.
① Floresan qo'zg'alish usullari Qo'zg'atuvchi yorug'likning to'lqin uzunligi diapazoniga ko'ra, ikkita tur mavjud: UV qo'zg'atish usuli (ultrabinafsha yoritish usuli) va BV qo'zg'atish usuli (ko'k-binafsha yoritish usuli). U ko'rinmas floresans hosil qiladi, shuning uchun kuzatilgan floresans namunaning o'zidan kelib chiqadi. Bu usul o'ziga xos flüoresansni fonning avtoflüoresansidan osongina ajratib turadi.
② BV qo'zg'atish usuli BV qo'zg'atish usuli 404 nm va 434 nm markazida binafsha rangdan ko'k ranggacha bo'lgan qo'zg'atuvchi nurdan foydalanadi. Namunani nurlantirish uchun ko'k yorug'lik ishlatilganligi sababli, bu usul uchun qo'zg'atuvchi filtr tizimi ko'k nurni to'liq to'sib qo'yishi va faqat kerakli yashil va sariq nurning o'tishiga imkon berishi kerak.Flüoresan antikorlarni bo'yash uchun qo'zg'atuvchi nurning maksimal yutilish to'lqin uzunligi floresan bo'yoqning maksimal emissiya to'lqin uzunligiga yaqin. Shu sababli, BV qo'zg'alishi uchun filtr to'plami kesuvchi to'siq filtridan foydalanishi kerak. Bu usul qo'zg'atish uchun ko'k nurdan foydalanadi, shuning uchun floresan yig'ish samaradorligi nisbatan yuqori va yorqinroq tasvirlarni olish mumkin. Uning kamchiligi shundaki, 500 nm dan yuqori floresansni aniqlab bo'lmaydi va 500 nm dan yuqorida faqat sariq-yashil tasvirlarni ko'rish mumkin. Floresan antikorlarni bo'yashda o'ziga xoslikni baholash rang ma'lumotlariga bog'liq, shuning uchun BV qo'zg'atish usulining kamchiliklari nozik o'ziga xoslikni muhokama qilishda asosiy cheklov bo'lishi mumkin.
