Floresan mikroskoplar va oddiy optik mikroskoplar o'rtasidagi farqlar va xususiyatlar
Floresan mikroskop oddiy optik mikroskopdan farq qiladi, chunki u oddiy yorug'lik manbalari yoritilishida namunalarni kuzatmaydi. Buning o'rniga, mikroskop ostida namuna ichidagi lyuminestsent moddalarni qo'zg'atish uchun yorug'likning ma'lum bir to'lqin uzunligidan (odatda ultrabinafsha nur, ko'k binafsha nur) foydalanadi va ularning flüoresan nurlanishiga olib keladi. Shuning uchun lyuminestsent mikroskopda yorug'lik manbasining roli to'g'ridan-to'g'ri yoritish emas, balki namuna ichidagi floresan moddalarni qo'zg'atish uchun energiya manbai sifatida. Namunalarni kuzatishimiz mumkin bo'lgan sabab yorug'lik manbasining yoritilishi bilan bog'liq emas, balki hayajonlangan yorug'lik energiyasini o'zlashtirgandan so'ng, namuna ichidagi floresan moddalar tomonidan ko'rsatiladigan floresans hodisasi. Bundan ko'rinib turibdiki, lyuminestsent mikroskopiyaning o'ziga xos xususiyati, asosan, uning yorug'lik manbai ma'lum bir to'lqin uzunligi diapazonida ko'p miqdorda qo'zg'atuvchi yorug'lik berishi mumkin, shuning uchun namunadagi lyuminestsent moddalar qo'zg'atuvchi yorug'likning zarur intensivligini olishi mumkin. Shu bilan birga, floresan mikroskoplar mos keladigan filtr tizimlariga ega bo'lishi kerak. Floresan mikroskop floresan to'qimalar kimyosida asosiy vositadir. U ultra{7}}yuqori kuchlanishli yorug'lik manbai, filtr tizimi (jumladan, qo'zg'atuvchi va bostiruvchi filtr plitalari), optik tizim va suratga olish tizimi kabi asosiy komponentlardan iborat. Namunani qo'zg'atish va flüoresansni chiqarish uchun ma'lum bir to'lqin uzunligidagi yorug'likdan foydalanadi.
1. Floresan qo'zg'alish usullari: Yorug'likning to'lqin uzunligi diapazoniga ko'ra, ikkita tur mavjud: UV qo'zg'alish usuli (ultrabinafsha yorug'lik yordamida) va BV qo'zg'alish usuli (ko'k binafsha nur yordamida). UV qo'zg'atish usuli qo'zg'atish uchun 400 nm dan qisqaroq ultrabinafsha nurlardan foydalanadi. Bu usulda ko'rinadigan qo'zg'atuvchi yorug'lik mavjud emas, shuning uchun kuzatilgan floresans bo'yoqning o'ziga xos floresansini namoyish etadi, bu esa namunadagi o'ziga xos flüoresansni fon to'qimalarining o'z-o'zidan floresansidan ajratishni osonlashtiradi.
2. BV qo'zg'atish usuli: U 404nm va 434nm markazida joylashgan ultrabinafshadan ko'k nurgacha qo'zg'alishni o'z ichiga oladi. Bu usul namunani nurlantirish uchun koʻk nurdan foydalanadi, shuning uchun lyuminestsent kuzatuv tizimining kesilgan filtri-koʻk yorugʻlikni toʻliq toʻsib qoʻyadigan va kerakli yashil va sariq floresansdan toʻliq oʻtib ketadigan filtrdan foydalanishi kerak. Floresan antikor usuli uchun ishlatiladigan floresan pigmentlar. Qo'zg'atuvchi yorug'likning maksimal yutilish to'lqin uzunligi va floresansning maksimal emissiya to'lqin uzunligi nisbatan yaqin, shuning uchun BV qo'zg'atish usulida ishlatiladigan filtr o'tkir kesilgan filtrdan foydalanishi kerak. Ushbu usul ko'k nurni qo'zg'atuvchi yorug'lik sifatida ishlatishi mumkin, shuning uchun lyuminestsent pigmentlarning yutilish samaradorligi yuqori va yorqinroq tasvirlarni olish mumkin. Kamchilik shundaki, 500 nm dan past bo'lgan floresans ko'rinmaydi, 500 nm dan yuqori floresans esa butun tasvirni sariq rangga aylantiradi. Floresan antikor usulida o'ziga xoslik asosan floresan pigmentlarga xos bo'lgan rang bilan belgilanadi, shuning uchun nozik o'ziga xoslikni muhokama qilganda, yuqorida aytib o'tilgan BV qo'zg'atish usulining kamchiliklari ko'pincha sezilarli ta'sir ko'rsatadi.
