Mikroorganizmlar sonini aniqlash-Mikroskopik to'g'ridan-to'g'ri hisoblash usuli!
Bakteriyalar populyatsiyasining ko'payishi hujayralar sonining ko'payishi yoki hujayrali materialning ko'payishi bilan namoyon bo'ladi. Hujayralar sonini aniqlash usullariga to'g'ridan-to'g'ri mikroskopik hisoblash, plastinkalar soni, spektrofotometr yordamida loyqalikni baholash, eng ehtimolli MPN soni va membranani filtrlash kiradi. (membrana filtratsiyasi) va boshqalar. Hujayra moddalarini o'lchash usullari hujayra quruq vaznini aniqlash, azot miqdori, RNK va DNK miqdori kabi hujayra tarkibiy qismlarini aniqlash va metabolit mahsulotlarini aniqlashni o'z ichiga oladi. Muxtasar qilib aytganda, mikroblarning o'sishini o'lchashning ko'plab usullari mavjud, ularning har biri o'zining afzalliklari va kamchiliklariga ega. Usul ishning o'ziga xos talablariga muvofiq tanlanishi kerak. Ushbu tajriba asosan ishlab chiqarish va ilmiy tadqiqot ishlarida keng qo'llaniladigan mikroskopni to'g'ridan-to'g'ri hisoblash usulini taqdim etadi.
1. Maqsad talablari
1. Qon hujayralarini hisoblash taxtasi bilan hisoblash tamoyilini aniqlang.
2. Qon hujayralarini hisoblash taxtasi yordamida mikroorganizmlarni sanash usulini o'zlashtiring.
2. Asosiy tamoyillar
Mikroskopning to'g'ridan-to'g'ri hisoblash usuli - bu oddiy, tez va intuitiv usul bo'lib, tekshiriladigan namunaning oz miqdordagi suspenziyasini aniqlangan maydon va hajmga ega (bakteriometr deb ham ataladi) maxsus slaydga joylashtiradi va uni to'g'ridan-to'g'ri mikroskop ostida hisoblaydi. Usullari. Hozirgi vaqtda uyda va xorijda keng tarqalgan bo'lib foydalaniladigan bakteriometrlarga quyidagilar kiradi: gemositometr, Peteroff-Hauser bakteriometri va Hawksley bakteriometri va boshqalar. Ularning barchasi xamirturush, bakteriyalar, mog'or sporalari va boshqa suspenziyalarni hisoblash uchun ishlatilishi mumkin va asosiy tamoyillar bir xil. Oxirgi ikki bakterial hisoblagichning umumiy hajmi 0.0Qopqoq oyna bilan qoplanganidan keyin 2 mm3 ni tashkil qiladi va qopqoq oynasi va slayd orasidagi masofa atigi 0,02 mm. Shuning uchun, moyga botirish ob'ektiv linzalari bakteriyalar kabi kichikroq hujayralarni kuzatish va aniqlash uchun ishlatilishi mumkin. hisoblash. Ushbu bakteriometrlardan foydalanishdan tashqari, mikroskop ostida smear maydonining ko'rish maydoni maydoniga nisbatini bevosita kuzatuvchi baholash usuli ham mavjud. Bu usul odatda sutni bakteriologik tekshirish uchun ishlatiladi. Mikroskopning to'g'ridan-to'g'ri hisoblash usulining afzalliklari shundaki, u intuitiv, tez va oson ishlaydi. Biroq, bu usulning kamchiligi shundaki, o'lchangan natija odatda o'lik bakteriyalar va tirik bakteriyalar yig'indisidir. Hozirgi vaqtda ushbu kamchilikni bartaraf etishning ba'zi usullari mavjud, masalan, mikrokamera madaniyatini bo'yash uchun yashovchan bakteriyalarni birlashtirish (qisqa vaqt) va hujayra bo'linish ingibitorlarini qo'shish, faqat tirik bakteriyalarni hisoblash maqsadiga erishish.
Ushbu tajriba mikroskop ostida to'g'ridan-to'g'ri hisoblash uchun misol sifatida gemositometrdan foydalanadi. Boshqa ikkita bakteriometrdan foydalanish uchun har bir ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga qarang. Gemositometr yordamida mikroskop ostida to'g'ridan-to'g'ri hisoblash mikrobial ro'yxatga olishning keng tarqalgan usuli hisoblanadi. Hisoblash taxtasi uchta platformani tashkil etuvchi to'rtta olukli maxsus slayddir; o'rtadagi kengroq platforma qisqa gorizontal truba bilan ikki yarmiga bo'linadi va platformaning har ikki tomonida panjara panjarasi mavjud. Har bir kvadrat panjara to'qqizta katta kvadratga bo'lingan va o'rtadagi katta kvadrat hisoblash xonasidir. Qon hujayralarini hisoblash taxtasining tuzilishi {0}} rasmda ko'rsatilgan. Hisoblash kamerasining shkalasi uchun odatda ikkita spetsifikatsiya mavjud. Ulardan biri 25 ta oʻrta kvadratga boʻlingan katta kvadrat va har bir oʻrta kvadrat 16 ta kichik kvadratga boʻlingan (15-2-rasm); ikkinchisi katta kvadrat. Kvadrat panjara 16 ta o'rta kvadratga bo'lingan va har bir o'rta kvadrat 25 ta kichik kvadratga bo'lingan. Biroq, u qanday hisoblash taxtasi bo'lishidan qat'i nazar, har bir katta kvadratda 400 ta kichik kvadrat mavjud. Har bir katta kvadratning yon uzunligi lmm, keyin har bir katta kvadratning maydoni lmm2 ga teng. Qopqoq slip qoplangandan so'ng, qopqoq va slayd orasidagi balandlik 0,lmm ni tashkil qiladi, shuning uchun hisoblash kamerasining hajmi 0,lmm3 (millilitrning o'ndan mingdan biri). Shakl 15-1 Qon hujayralarini hisoblash taxtasining tuzilishi (1) 15-2-rasm Qon hujayralarini hisoblash taxtasining tuzilishi (2) A. Old ko‘rinish; B. Uzunlamasına kesma; kengaytirilgan kvadrat panjara, o'rtadagi katta kvadrat - sanoq kamerasi 1. Qon hujayralarini hisoblash taxtasi; 2. Qopqoq slip; 3. Hisoblash kamerasida sanashda odatda beshta kvadratdagi bakteriyalarning umumiy sonini hisoblang, so'ngra har bir kvadratning o'rtacha qiymatini toping va keyin 25 yoki 16 ga ko'paytiring, keyin katta kvadratdagi bakteriyalarning umumiy soni aylantiriladi. 1 ml bakterial eritmadagi bakteriyalarning umumiy soniga. Faraz qilaylik, beshta o'rta kvadratdagi bakteriyalarning umumiy soni A, bakterial eritmaning suyultirish koeffitsienti esa B. Agar u 25 ta o'rta kvadratli hisoblash plastinkasi bo'lsa, u holda 1 ml bakterial eritmadagi bakteriyalarning umumiy soni {{ 23}} A/5×25×104× B=50000A·B (dona) Xuddi shunday, agar u 16 kvadratli hisoblash plastinkasi bo‘lsa, 1 ml bakterial eritmadagi umumiy bakteriyalar soni {{ 30}}A/5×16×104×B=32000A·B (dona),,
