Mikroorganizmlar sonini aniqlash - mikroskopning to'g'ridan-to'g'ri hisoblash usuli!
Bakteriyalar populyatsiyasining ko'payishi hujayralar sonining ko'payishi yoki hujayra massasining ko'payishi bilan namoyon bo'ladi. Hujayralar sonini aniqlash usullari to'g'ridan-to'g'ri mikroskop hisoblash usuli, plastinka koloniyalarini hisoblash usuli, fotoelektrik moy nisbati usuli, maksimal ehtimollik usuli va membranani filtrlash usulini o'z ichiga oladi. Hujayra moddasini o'lchash usullari hujayra quruq vaznini aniqlash, azot, RNK va DNK kabi ma'lum hujayra tarkibiy qismlarini aniqlash va metabolitlarni aniqlashni o'z ichiga oladi. Muxtasar qilib aytganda, mikroorganizmlarning o'sishini o'lchash uchun ko'plab usullar mavjud, ularning har biri o'zining afzalliklari va kamchiliklariga ega va muayyan vaziyatga qarab tanlanishi kerak. Ushbu tajriba asosan ishlab chiqarish va ilmiy tadqiqotlarda keng qo'llaniladigan mikroskopni to'g'ridan-to'g'ri hisoblash usulini taqdim etadi.
1. Maqsadga qo'yiladigan talablar
1. Qon hujayralarini hisoblash tamoyilini aniqlang.
2. Qon hujayralarini hisoblagich yordamida mikroorganizmlarni sanash usulini o'zlashtiring.
2. Asosiy tamoyillar
Mikroskopning to'g'ridan-to'g'ri hisoblash usuli - bu ma'lum bir maydon va hajmga ega (shuningdek, bakteriyalar hisoblagichi sifatida ham tanilgan) maxsus shisha slaydda sinovdan o'tkaziladigan namunaning oz miqdordagi suspenziyasini to'g'ridan-to'g'ri hisoblashning oddiy, tez va intuitiv usuli. Usullari. Hozirgi vaqtda uyda va xorijda keng tarqalgan ishlatiladigan bakteriyalar hisoblagichlari quyidagilardir: qon hujayralarini hisoblash taxtasi, Peteroff-Hauser bakteriyalar hisoblagichi va Hawksley bakteriyalar hisoblagichi va boshqalar. Ular xamirturush, bakteriyalar, mog'or sporalari va boshqa suspenziyalarni hisoblash uchun ishlatilishi mumkin va asosiy printsipi bir xil. Oxirgi ikki turdagi bakteriya hisoblagichlarining umumiy hajmi 0.0Qopqoq oynasi bilan qoplanganidan keyin 2mm3 va qopqoq oynasi va slayd orasidagi masofa atigi 0,02 mm, shuning uchun moy immersion ob'ektiv linzalari bakteriyalar kabi kichik hujayralarni kuzatish va kuzatish uchun ishlatilishi mumkin. hisoblash. Ushbu bakteriometrlarga qo'shimcha ravishda, odatda sutni bakteriologik tekshirish uchun qo'llaniladigan smear maydonining to'g'ridan-to'g'ri mikroskop ostida kuzatilgan ko'rish maydoni maydoniga nisbatini baholash usuli ham mavjud. Mikroskopning to'g'ridan-to'g'ri hisoblash usulining afzalliklari intuitiv, tez va oson ishlaydi. Biroq, bu usulning kamchiligi shundaki, o'lchangan natija odatda o'lik va tirik hujayralar yig'indisidir. Hozirgi vaqtda ushbu kamchilikni bartaraf etishning ba'zi usullari mavjud, masalan, mikrokamera madaniyatini bo'yash (qisqa vaqt) va hujayra bo'linish inhibitörlerini qo'shish, faqat yashovchan bakteriyalarni hisoblash maqsadiga erishish uchun.
Ushbu tajribada gemositometr to'g'ridan-to'g'ri mikroskopik hisoblash uchun misol sifatida ishlatilgan. Boshqa ikki turdagi bakteriya hisoblagichlaridan foydalanish uchun har bir ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga qarang. To'g'ridan-to'g'ri mikroskop ostida gemositometr yordamida hisoblash mikroorganizmlarni hisoblash uchun keng tarqalgan usuldir. Hisoblash plitasi - bu maxsus shisha slayd bo'lib, uning ustida uchta platforma to'rtta tirqishdan tashkil topgan; o'rtadagi kengroq platforma qisqa ko'ndalang tirqish bilan ikki yarmiga bo'linadi va platformaning har ikki tomonida panjara mavjud. Har bir panjara to'qqizta katta kvadratga bo'lingan va o'rtadagi katta kvadrat sanoq xonasidir. Qon hujayralarini hisoblash plastinkasining tuzilishi l{{{10}}}}-rasmda ko'rsatilgan. Sanoq xonasining shkalasi odatda ikkita xususiyatga ega, biri katta kvadrat 25 ta o'rta kvadratga bo'lingan va har bir o'rta kvadrat 16 ta kichik kvadratga bo'lingan (15-2-rasm); ikkinchisi katta kvadrat. Kvadrat 16 ta o'rta kvadratga bo'lingan va har bir o'rta kvadrat 25 ta kichik kvadratga bo'lingan, ammo u qanday hisoblash taxtasi bo'lishidan qat'i nazar, har bir katta kvadratda 400 ta kichik kvadrat mavjud. Har bir katta kvadratning yon uzunligi 1 mm, har bir katta kvadratning maydoni 1 mm2. Qopqoq oyna bilan qoplanganidan so'ng, qopqoq oynasi va slayd oynasi orasidagi balandlik 0,1 mm, shuning uchun hisoblash kamerasining hajmi 0,lmm3 (millitrning mingdan bir qismi). Rasm 15-1 Qon hujayralarini hisoblash taxtasining tuzilishi (1) rasm 15-2 Qon hujayralarini hisoblash taxtasining tuzilishi (2) A. Old ko‘rinish; B. Uzunlamasına kesma ko'rinishi; Kattalashtirilgan panjara, o'rtadagi katta kvadrat hisoblash kamerasi 1. Qon hujayralari Hisoblash plitasi; 2. Qopqoq shisha; 3. Sanoq kamerasida sanashda, odatda, bakteriyalarning umumiy sonini besh kvadratchada hisoblang, so'ngra har bir kvadratning o'rtacha qiymatini hisoblang va 25 yoki 16 ga ko'paytiring, shundan so'ng katta kvadratdagi bakteriyalarning umumiy soni katta kvadratga aylanadi. 1 ml bakterial eritmadagi bakteriyalarning umumiy soni. Besh kvadratdagi bakteriyalarning umumiy soni A, bakterial eritmaning suyultirish nisbati B bo‘lsin. Agar u 25 kvadratli hisoblash plastinkasi bo‘lsa, 1 ml bakterial eritmadagi umumiy bakteriyalar soni {{26} } A/5×25×104× B=50000A·B(dona) Xuddi shunday, agar u 16 ta oʻrta kvadratli hisoblash plastinkasi boʻlsa, 1ml bakterial eritmadagi bakteriyalarning umumiy soni=A/ 5×16×104×B=32000A·B (dona)
3. Uskunalar
1. Bakteriyalar
Saccharomyces cerevisiae
2. Asboblar yoki boshqa idishlar
Gemositometr, mikroskop, qopqoq, steril kapillyar tomchi.
4. Operatsion bosqichlari
1. Bakterial suspenziyani tayyorlash
Saccharomyces cerevisiae steril fiziologik sho'r suv bilan tegishli konsentratsiyali bakterial suspenziyaga tayyorlandi.
2. Mikroskop bilan hisoblash xonasi
Namunalarni qo'shishdan oldin hisoblash plitasining hisoblash kamerasini mikroskopik tarzda tekshiring. Agar axloqsizlik bo'lsa, hisoblashdan oldin uni tozalash va quritish kerak.
3. Namuna qo'shing
Toza va quruq gemositometrni qopqoq bilan yoping, so‘ngra steril kapillyar tomizgich yordamida qopqoq chetidan chayqalgan Saccharomyces cerevisiae suspenziyasining kichik bir tomchisini tomizing va bakterial eritma kapillyar osmoz orqali avtomatik ravishda bo‘shliq bo‘ylab harakatlanishiga imkon bering. Sanoq xonasiga kirib, umumiy sanoq xonasi bakterial suyuqlik bilan to'ldirilishi mumkin. Namuna olishda birinchi navbatda bakterial eritmani silkiting; namunalarni qo'shganda, hisoblash kamerasida havo pufakchalari hosil bo'lmasligi kerak.
4. Mikroskop yordamida hisoblash
Namuna qo'shgandan so'ng, 5 daqiqa davomida harakatsiz turing, so'ngra gemositometrni mikroskop pog'onasiga qo'ying, avval kam quvvatli mikroskop yordamida hisoblash kamerasining joylashishini toping va keyin hisoblash uchun yuqori quvvatli mikroskopga o'ting. Mikroskop nurining intensivligini mos ravishda sozlang. Yoritish uchun nometall ishlatadigan mikroskoplar uchun yorug'likning bir tomonidan chetga chiqmaslikka e'tibor bering, aks holda hisoblash xonasining kvadrat chiziqlarini ko'rish sohasida aniq ko'rish oson bo'lmaydi yoki faqat vertikal chiziqlar yoki gorizontal chiziqlar bo'ladi. ko'rish. Agar sanashdan oldin bakterial eritma juda konsentrlangan yoki juda suyultirilganligi aniqlansa, hisoblashdan oldin suyultirishni qayta sozlash kerak. Odatda, namunani suyultirish uchun har bir kichik hujayrada taxminan 5-10 bakteriya kerak bo'ladi. Har bir sanoq kamerasi sanash uchun 5 ta o‘rta katakchani (ixtiyoriy 4 ta burchak va markazda bitta o‘rta katakcha) tanlaydi. To'r chizig'ida joylashgan katakchalar odatda faqat yuqori va o'ng chiziqlarda hisoblanadi. Xamirturush kurtaklari paydo bo'lganda, kurtakning kattaligi ona hujayraning yarmiga yetganda, u ikki bakteriya hujayrasi hisoblanadi. Namunani hisoblash uchun ikkita hisoblash kamerasidan o'rtacha qiymatni hisoblab, namunadagi bakterial tarkibni hisoblang.
5. Qon hujayralari sonini yuving
Foydalanishdan keyin qon hujayralarini hisoblash taxtasini jo'mrakdagi suv bilan yuvib tashlang, qattiq narsalar bilan ishqalamang va yuvgandan keyin uni o'zingiz yoki fen bilan quriting. Har bir kichik hujayrada qoldiq bakteriyalar yoki boshqa cho'kmalar mavjudligini kuzatish uchun mikroskopik tekshirish. Agar u toza bo'lmasa, toza bo'lgunga qadar uni qayta-qayta yuvish kerak.
