Konfokal floresan mikroskopiyaning asosiy tuzilishi
(1) Skanerlash moduli
Skanerlash moduli asosan pin teshigi yorug'lik chizig'idan (optik bo'laklarning qalinligini nazorat qilish), spektroskopdan (to'lqin uzunligi bo'yicha yorug'lik tarqalish yo'nalishini o'zgartirish), emissiya floresan kolorimetridan (aniqlash uchun ma'lum bir to'lqin uzunligi diapazonida yorug'likni tanlash) va detektor (fotomultiplikator trubkasi). Floresan namunasidagi aralash floresans skanerga kiradi va aniqlovchi pinhole yorug'lik paneli, spektrometr va kolorimetr tomonidan tanlanganidan so'ng, u turli xil floresan kanallarida aniqlanadigan va mos keladigan konfokal tasvirlarni hosil qiluvchi turli xil monoxromatik floresanlarga bo'linadi. Shu bilan birga, kompyuter ekranida bir nechta parallel monoxromatik floresan tasvirlar va ularning kompozit tasvirlari ko'rsatilishi mumkin.
(2) Floresan mikroskopiya tizimi
Mikroskop tizimning tasvir sifati bilan bog'liq bo'lgan LSCM ning asosiy komponentidir. Mikroskopning optik yo'lini tasvir sifati va o'lchov aniqligiga ta'sir qilmasdan optik variantlari bilan cheksiz masofadagi optik tizimga osongina kiritish mumkin. Ob'ektiv katta raqamli diafragma tekis maydon apokromatik ob'ektiv bo'lishi kerak, bu floresan olish va aniq tasvirlash uchun foydalidir. Ob'ektiv linzalar guruhini konvertatsiya qilish, rang filtri guruhini tanlash, sahnaning harakatini sozlash va fokus tekisligining xotira blokirovkasi kompyuter tomonidan avtomatik ravishda boshqarilishi kerak.
Lazerli skanerlashda ishlatiladigan lyuminestsent mikroskop odatda an'anaviy lyuminestsent mikroskop bilan bir xil, lekin u o'ziga xos xususiyatlarga ega: u skanerga ulanishi kerak, shunda lazer namunani nurlantirish uchun mikroskop ob'ektiviga kirishi mumkin. namuna tomonidan chiqarilgan floresans detektorga etib boradi; Simob lampalarini lazerga aylantiradigan yorug'lik yo'lini o'zgartirish moslamasi talab qilinadi va simob chiroqning yorug'lik qizg'inligini sozlash mumkin.
(3) Umumiy lazerlar
Lazerli skanerlash konfokal mikroskopida ishlatiladigan lazer manbalari bitta lazerli va ko'p lazerli tizimlarni o'z ichiga oladi va keng tarqalgan lazerlar quyidagi uchta turni o'z ichiga oladi:
Yarimo'tkazgichli lazer: 405nm (ultrabinafsha spektral chiziq yaqinida)
Argon ion lazeri: 457nm, 477nm, 488nm, 514nm (koʻk yashil chiroq)
He-Ne lazeri: 543nm (yashil nurli He-Ne yashil lazeri) 633nm (qizil nurli He-Ne qizil lazeri)
UV lazer (UV lazer): 351 nm, 364 nm (UV nuri)
(4) Yordamchi uskunalar
Havo sovutgichli, suv bilan sovutilgan sovutish tizimlari va tartibga solinadigan quvvat manbalari.
Lazerni skanerlovchi konfokal mikroskopning asosiy ish printsipi birinchi navbatda lazerdan ma'lum bir to'lqin uzunligi qo'zg'atuvchi nurni chiqarishdir. Kuchaytirilgandan so'ng yorug'lik nuqta yorug'lik manbasini hosil qilish uchun skanerdagi yoritilgan pin teshigi yorug'lik chizig'idan o'tadi. Ob'ektiv linza namunaning fokus tekisligiga qaratiladi va namunadagi mos keladigan yoritilgan nuqtalar hayajonlanadi va floresans chiqaradi. Aniqlash teshigi yorug'lik panelidan o'tgandan so'ng, u detektorga etib boradi va kompyuter monitoringi ekranida tasvirlanadi. Shunday qilib, fokus tekisligidagi namunaning har bir nuqtasining floresan tasvirlari orqali to'liq konfokal tasvir hosil bo'ladi, bu yorug'lik bo'limi deb ataladi.
