Flüoresans umumiy ichki aks ettirish floresan mikroskopini qo'llash
TIRFM (Total Internal Reflection Fluorescence Microscope), umumiy ichki aks ettiruvchi lyuminestsent mikroskop, yorug'lik sinishi ko'rsatkichi yuqori bo'lgan muhitdan pastroq sinishi indeksiga ega bo'lgan muhitga tushganda, tushuvchi burchak etarlicha katta bo'lsa, barcha yorug'lik sinmasdan aks etadi, lekin ikkita muhitning interfeysida ob'ekt yuzasini kuzatishni amalga oshirish uchun interfeys yaqinida 100nm ichida flüoresansni qo'zg'atishi mumkin bo'lgan yo'qolgan to'lqinlar ishlab chiqariladi. Qo'zg'atuvchi yorug'lik an'anaviy lyuminestsent mikroskopning yoritgichi yoki maxsus yoritgich orqali yuborilishi va lazerning tushish burchagini boshqarishi mumkin. Dala qo'zg'alishining lahzali usuli qo'zg'atuvchi nurning detektorga kirishiga yo'l qo'ymaslik uchun ishlatiladi. Shisha va suv o'rtasidagi interfeysdagi qo'zg'atuvchi yorug'lik aks ettirish orqali amalga oshirilgan to'liq ichki hosil qiladi. Qo'zg'atuvchi yorug'likning eksponensial susayishi tufayli, faqat umumiy aks ettirish yuzasiga juda yaqin bo'lgan namuna maydoni floresan ko'zgu hosil qiladi, bu fon yorug'lik shovqinining kuzatuv maqsadiga aralashuvini sezilarli darajada kamaytiradi, shuning uchun bu texnologiya dinamik kuzatishda keng qo'llaniladi. hujayra yuzasi moddalari.
Umumiy ichki aks ettiruvchi floresan mikroskopining (TIRFM) sxematik diagrammasi
①Namuna ②Evanescent to'lqin diapazoni ③Qopqoq oynasi ④Moyga botirish ⑤Nishon ⑥Emissiya nuri (signal) ⑦Eksiatsiya nuri
Umumiy ichki aks ettirishga erishish uchun katta hodisa burchagi talab qilinadi, masalan, shisha-suv interfeysidagi hodisa burchagi 61 darajadan kattaroqdir. Bunga prizma asosidagi TIRFM deb ataladigan prizma yoki ob'ektiv tipdagi TIRFM deb ataladigan yuqori raqamli diafragmaga ega ob'ektiv linzalar orqali erishish mumkin. Hozirgi tijoratlashtirilgan umumiy ichki aks ettirish floresan mikroskoplari odatda yuqori tezlik va yuqori aniqlikdagi ob'ektiv linzalar turiga kiradi.
Umumiy ichki aks ettiruvchi floresan mikroskopiya ba'zi biologik sohalarda keng qo'llaniladi, chunki u ob'ektlar yuzasida juda nozik diapazonda (100 nm dan kam) floresan kuzatuvini amalga oshirishi mumkin. Masalan, quyidagi ilovalar:
Hujayra yuzasi tasvirlarini kuzatish: hujayra membranasi yuzasi tuzilishi, hujayra yuzasi bilan aloqa, membrana sirtining dinamikasi / oqsil lokalizatsiyasi.
Yagona molekulali kuzatish va manipulyatsiya: miyozin, aktin va Cy{1}}yorliqli ATP.
Hujayra membranasi yuzasi harakati: pufakchalarni yutish, pufakchalarni ekshalatsiyalash va vesikula ekzokrin kabi. the
Hujayra membranasida kaltsiy uchqunlari hodisasini kuzatish, ion kanallarini kuzatish.
Molekulyar motor tadqiqotlari: aylanish motorlari, sitoskeletal oqsillar, polimerlar, G oqsillari, halqa oqsillari, nukleotid motorlari.
Biologiya sohasidan tashqari, u kimyoviy molekulyar tuzilmalarni kuzatish uchun kimyo sohasida ham yaxshi qo'llanmalarga ega.
