To'g'ri floresan mikroskopni qanday tanlash mumkin
Floresan mikroskop laboratoriyalar va patologiya bo'limlari uchun standart mikroskopik tasvirlash uskunasidir. U kuzatish va tasvirlash uchun floresan xususiyatlaridan foydalanadi. U hujayra biologiyasi, neyrobiologiya, botanika, mikrobiologiya, patologiya, genetika va boshqa sohalarda keng qo'llaniladi. Floresan tasvirlash yuqori sezuvchanlik va yuqori o'ziga xoslik afzalliklariga ega va to'qimalar va hujayralardagi o'ziga xos oqsillar va organellalarning tarqalishini kuzatish, kolokalizatsiya va o'zaro ta'sirni o'rganish, ion kontsentratsiyasining o'zgarishi kabi hayotiy dinamik jarayonlarni kuzatish uchun juda mos keladi. , va boshqalar.
Mikroskopni tanlash
Floresan mikroskoplari asosan uchta toifaga bo'linadi: tik floresan mikroskoplar (kesish uchun mos), teskari floresan mikroskoplar (tirik hujayralar uchun mos, kesmani hisobga olgan holda), stereoskopik floresan mikroskoplar (kattaroq namunalar uchun mos keladi, masalan, o'simliklar, zebra baliqlari). embrion) , medaka, sichqon / kalamush organlari va boshqalar).
Floresan filtri kublarini tanlash
Floresan zondlarining qo'zg'alish va emissiya to'lqin uzunliklarini hisobga olishdan tashqari, filtr bloklarini tanlashda ko'p rangli etiketli namunalar uchun o'ziga xos bo'lmagan qo'zg'alish va o'zaro rang mavjudligini ham hisobga olish kerak. Tajribada biz qo'zg'alish uchun qo'zg'alish cho'qqisiga eng yaqin to'lqin uzunligini tanlashga harakat qilamiz va qabul qilish diapazoni emissiya cho'qqisini o'z ichiga olishi kerak. Misol uchun, Alexa Fluor 488 ning qo'zg'alish cho'qqisi 500 nm ni tashkil qiladi va floresan mikroskopda 480/40 qo'zg'atuvchi filtrni tanlash mumkin. Floresan mikroskoplarda keng tarqalgan bo'lib foydalaniladigan floresan filtr kublarini ikki turga bo'lish mumkin: uzun o'tish (qisqacha LP) va tarmoqli o'tish (qisqacha BP), ular ham ehtiyojlarga qarab tanlanishi kerak.
Floresan yorug'lik manbasini tanlash
Hozirgi vaqtda tez-tez ishlatiladigan lyuminestsent yorug'lik manbalariga simob lampalar, metall halid lampalar va so'nggi yillarda tez rivojlanayotgan LED yorug'lik manbalari kiradi. Floresan yorug'lik manbasining spektri doimiy va uzluksiz bo'lib, energiya turli diapazonlarda har xil bo'ladi. Nisbatan tor spektrli diapazon, barqaror energiya chiqishi, uzoq umr ko'rish, xavfsizlik va atrof-muhitni muhofaza qilish va boshqa ko'plab afzalliklar tufayli LED yorug'lik manbai asta-sekin floresan mikroskopning asosiy yorug'lik manbaiga aylanmoqda.
konfokal mikroskop
An'anaviy lyuminestsent mikroskopni kuzatishda lyuminestsent marker moddalari va avtoflüoresan tuzilmalarining bir-birining ustiga chiqishi tufayli ular chambarchas birlashtiriladi, an'anaviy epi-flüoresan mikroskop ob'ektiv linzalari nafaqat fokus tekisligidan yorug'likni to'playdi, balki tarqoq nurni ham yuqorida va pastda to'playdi. fokus tekisligi , natijada tasvir o'lchamlari va kontrasti sezilarli darajada kamayadi.
Konfokal tasvir bu muammoni faqat fokus tekisligidan aks ettirilgan yorug'lik qismini aniqlash orqali hal qiladi. Yorug'lik manbai fokus tekisligida kichik va nozik yorug'lik nuqtasini hosil qilish uchun pin teshigidan o'tadi. Fokus tekisligidan chiqadigan yorug'lik ob'ektiv linzalar tomonidan to'planadi. Ob'ektiv linzaning fokus tekisligidan yuqorida yoki pastda joylashgan nuqtadan chiqarilgan floresansning ko'p qismi kichik teshikka yaqinlasha olmaydi. Fokus tekisligida joylashgan lyuminestsent va fokusdan tashqari floresansning kichik qismi pin teshigidan o'tishi mumkin, fokus tekisligidan tashqaridagi yorug'lik nurlari esa pin teshigi plastinkasining old yoki orqa tomonida birlashadi va detektorga kirishdan bloklanadi. pin teshigi. Aniqlangan tasvir fokus tekisligidan olingan tasvirdir, shuning uchun yakuniy tasvir sifati sezilarli darajada yaxshilanadi.
Lazerli skanerlash konfokal mikroskopning afzalliklari va funktsiyalarining amaliyligi tufayli konfokal mikroskop yuqori aniqlikdagi hujayra biologiyasi, botanika va hujayra tadqiqotlari sohasida ajralmas eksperimental yordamchi hisoblanadi. Shu bilan birga, kelajakdagi ilmiy tadqiqot markazida u eng asosiy va asosiy ilmiy tadqiqot vositasi bo'ladi.
