Konfokal lazer mikroskopining afzalliklari nimada
An'anaviy keng maydonli mikroskoplar bilan taqqoslaganda, lazerli skanerlash konfokal mikroskoplari yuqori aniqlik, yuqori aniqlik va yuqori sezuvchanlik xususiyatlariga ega. U biotibbiyot sohasida keng qo'llaniladi va bu sohada muhim tasvirlash vositasiga aylandi. Nega konfokal shunchalik ko'p sevgiga ega bo'lishi mumkin va u qanday afzalliklarga ega? Ushbu maqolada konfokalning afzalliklarini muhokama qilish uchun uchta jihat keltirilgan.
Signalni faqat fokus tekisligida to'plang, bu tasvirni loyqalikdan ravshan qiladi
Xo'sh, konfokal mikroskopiya bu afzalliklarga qanday erishadi? Bu asosiy konfokal apparat bilan bog'liq - 2-rasmda ko'rsatilganidek, pin teshigi. Bu detektor oldidagi kichik teshik bo'lib, optik tekislikda namunaning fokus tekisligi konjugatida joylashgan. Qo'zg'atuvchi yorug'lik namunani nurlantirganda, fokus tekisligi ham, namuna maydonining fokal bo'lmagan tekisligi ham flüoresans signallarini hosil qilish uchun qo'zg'aladi, tegishli teshik o'lchamini (odatda 1 Au) sozlang, shunda fokus tekisligidagi floresan signali. (yashil nuqtali chiziq) fokus tekisligidan detektorga etib borish uchun pin teshigidan o'tadigan lyuminestsent signallari (qizil va ko'k chiziqli chiziqlar) bo'lishi mumkin, detektorga pin teshigi orqali etib bora olmaydi. Uskuna teshiklarini qo'shish orqali konfokal oddiy floresan mikroskoplarni tayyorlash usulini o'zgartirmasdan aniq va yuqori sifatli tasvirlarni olishi mumkin.
Teshik mavjudligi tufayli biz faqat fokus tekisligidagi signalni olishimiz va yuqori aniqlikdagi ikki o'lchovli tasvirni olishimiz mumkin. Z o'qi holatini doimiy ravishda sozlash orqali turli Z o'qi pozitsiyalarida ikki o'lchovli tasvirlarni olish mumkin va bir qator doimiy "optik bo'lak" tasvirlarni olish mumkin. Ushbu optik bo'laklarni olgandan so'ng, asbob dasturi bilan jihozlangan 3D moduli aniq 3D tasvirni yaratish uchun 3D tasvirni qayta tiklash uchun ishlatilishi mumkin. Ushbu vayron bo'lmaydigan, uzluksiz optik tasvirlar to'plami "hujayra KT" funktsiyasini amalga oshiradi.
Kolokalizatsiya natijalarining aniqligi tasvirning o'lchamlari bilan chambarchas bog'liq, shuning uchun biz kolokalizatsiya tajribalarini o'tkazishda yuqori aniqlikdagi tasvirlash usulini tanlashimiz kerak. An'anaviy mikroskoplar bilan solishtirganda, konfokal mikroskopiya yuqori aniqlikdagi afzalliklari tufayli kolokalizatsiya tadqiqotlari uchun kuchli vositaga aylandi.
Diffraktsiya chegarasi mavjudligi tufayli an'anaviy konfokal optik ruxsat 200 nm atrofida. 200nm dan kattaroq tuzilmalarni kuzatishimiz kerak bo'lganda, konfokal kolokalizatsiya darajasini aniq aniqlashi mumkin. Agar kolokalizatsiya tahlili zarur bo'lsa, konfokal dasturiy ta'minotda jihozlangan kolokalizatsiya tahlil moduli tanlanishi mumkin.
