Floresan mikroskopning tuzilishi va asosiy komponentlari
Floresan mikroskopiyasi immunofluoresan sitokimyoda muhim vositadir. U yorug'lik manbai, filtr plastinka tizimi va optik tizim kabi asosiy komponentlardan iborat. Flüoresansni chiqarish uchun namunani qo'zg'atish uchun yorug'likning ma'lum bir to'lqin uzunligidan foydalanish va ob'ektiv linzalar va ko'zoynak tizimini kuchaytirish orqali namunaning floresans tasvirini kuzatish.
Floresan mikroskopning tuzilishi va asosiy komponentlari
(1) yorug'lik manbai
Hozirgi vaqtda yorug'lik manbalari sifatida 200 Vt ultra yuqori bosimli simob lampalar ko'pincha ishlatiladi. Ular kvarts shishasidan yasalgan, o'rtada sharsimon shaklga ega bo'lib, ichiga ma'lum miqdorda simob to'ldirilgan. Ish paytida ikkita elektrod orasidagi zaryadsizlanish simobning bug'lanishiga olib keladi va to'pdagi havo bosimi tez ko'tariladi. Simob toʻliq bugʻlanganda, u 50-70 standart atmosfera bosimiga yetishi mumkin va bu jarayon odatda 5-15 daqiqa davom etadi. Ultra yuqori bosimli simob chiroqning lyuminestsensiyasi simob molekulalarining elektrodlar orasidagi zaryadsizlanishi bilan uzluksiz dissotsiatsiya va qisqarishi paytida yorug'lik kvantlarining emissiyasi natijasidir. U kuchli ultrabinafsha va ko'k-binafsha nurlar chiqaradi, bu turli floresan moddalarni qo'zg'atish uchun etarli, shuning uchun u floresan mikroskopiyada keng qo'llaniladi.
Ultra yuqori bosimli simob lampalar ham juda ko'p issiqlik chiqaradi. Shuning uchun, chiroq uyida yaxshi issiqlik tarqalish sharoitlari bo'lishi kerak va ish muhiti harorati juda yuqori bo'lmasligi kerak.
Yangi o'ta yuqori bosimli simob chiroqni ishlatish boshida yuqori kuchlanishsiz yoqish mumkin. Bir muddat foydalanishdan keyin uni yuqori kuchlanishda (taxminan 15000V) ishga tushirish kerak. Ishga tushgandan so'ng, texnik xizmat ko'rsatish kuchlanishi odatda 50-60 V, ish oqimi esa taxminan 4A ni tashkil qiladi. 200 Vt ultra yuqori bosimli simob chiroqning o'rtacha ishlash muddati har safar 2 soat davomida ishlatilsa, taxminan 200 soatni tashkil qiladi. Ish vaqti qanchalik qisqa bo'lsa, ishlash muddati shunchalik qisqa bo'ladi. Agar u atigi 20 daqiqa ishlatilsa, ishlash muddati 50 foizga qisqaradi. Shuning uchun, uni ishlatishda boshlang'ich sonini minimallashtiring. Lampochkadan foydalanish paytida uning yorug'lik samaradorligi asta-sekin kamayadi. Chiroq o'chgandan so'ng, qayta ishga tushirishdan oldin uning sovishini kuting. Simobning to'liq bug'lanishi tufayli elektrodga shikast etkazmaslik uchun lampochkani yondirgandan so'ng darhol o'chirmang. Umuman olganda, 15 daqiqa kutish kerak. Ultra yuqori bosimli simob chiroqning yuqori bosimi va kuchli ultrabinafsha nurlari tufayli, ko'zlarga zarar bermaslik va portlash sodir bo'lganda ishlamaslik uchun lampochkani yoqishdan oldin uni chiroq kamerasiga qo'yish kerak. .
Ultra yuqori bosimli simob chiroq (100 Vt yoki 200 Vt) yorug'lik manbasining sxemasi va transformator, balast va startni o'z ichiga olgan bir nechta qismlar. Chiroq xonasida lampochkaning yorug'lik markazini sozlash tizimi mavjud. Lampochka lampochkasi orqasida alyuminiy qoplamali konkav reflektor o'rnatilgan va old tomonida yorug'lik yig'uvchi linzalar o'rnatilgan.
Mahalliy o'ta yuqori bosimli simob chiroqli GCQ-200 yaxshi ishlashga ega va HBO-200 kabi import lampalar o'rnini bosa oladi. O'rtacha ishlash muddati 200 soatdan ortiq va narxi nisbatan past.
Mamlakatimda ishlab chiqilgan oddiy va ko'chma yuqori rangli yuqori haroratli bromli volfram floresan yorug'lik manbai qurilmasi kichik o'lchamli, engil, past quvvatga ega, o'zgaruvchan tok va shahar ikki tomonlama (doimiy to'g'ridan-to'g'ri quvvat manbai bilan), tashish uchun qulay, ishlatish uchun qulay va bor ommalashtirildi va tatbiq etildi.
(2) Rang filtri tizimi
Rang filtri tizimi floresan mikroskopning muhim qismi bo'lib, u qo'zg'atuvchi filtr plitasi va presslash filtri plitasidan iborat. Filtr plitasi modeli va har bir ishlab chiqaruvchining nomi ko'pincha bir xil emas. Filtr plitalari odatda asosiy rang nomi bilan ataladi, oldingi harflar rangni, orqadagi harflar oynani va raqamlar modelning xususiyatlarini ifodalaydi. olimp mikroskopi
(3) Ob'ektiv ob'ektiv
Har xil ob'ektiv linzalardan foydalanish mumkin, ammo akromatik ob'ektiv linzalar qo'llaniladi, chunki ularning avtoflüoresansi minimal va yorug'lik o'tkazuvchanlik xususiyatlari (to'lqin uzunligi diapazoni) floresansga mos keladi. Mikroskopning ko'rish maydonidagi tasvirning lyuminestsent yorqinligi ob'ektiv linzaning diafragma nisbati kvadratiga proportsional va uning kattalashishiga teskari proportsional bo'lganligi sababli, floresan tasvirning yorqinligini yaxshilash uchun katta hajmli ob'ektiv ob'ektiv. diafragma nisbatidan foydalanish kerak. Ayniqsa, yuqori kattalashtirishda uning ta'siri juda aniq. Shuning uchun, floresansi etarli bo'lmagan namunalar uchun, katta diafragma nisbati bo'lgan ob'ektiv linzalarni iloji boricha pastroq (4 ×, 5 ×, 6,3 × va boshqalar) okulyar bilan ishlatish kerak.
(4) Oyna
Reflektorning aks ettiruvchi qatlami odatda alyuminiy bilan qoplangan, chunki alyuminiy ultrabinafsha nurlar va ko'rinadigan yorug'likning ko'k-binafsha mintaqasida kamroq so'riladi va ko'zgu 90 foizdan ortiq, kumushning aks etishi esa atigi 70 foizni tashkil qiladi. Odatda, tekis reflektor ishlatiladi.
(5) Kondensator
Floresan mikroskopiya uchun mo'ljallangan kondensatorlar kvarts oynasidan yoki boshqa UV-shaffof shishadan tayyorlanadi. Ikki xil aniq maydon kondensatorlari va qorong'i maydon kondensatorlari mavjud. Fazali kontrastli floresan kontsentratorlar ham mavjud.
(6) Epi-yorug'lik moslamasi
Epi-yorug'lik moslamasining yangi turi - yorug'lik manbasidan yorug'lik interferentsiya spektroskopik filtrga tushgandan so'ng, filtrdagi qoplamaning xususiyatlari tufayli qisqa to'lqin uzunlikdagi qismi (ultrabinafsha va binafsha ko'k) aks etadi. Filtr yorug'lik manbasiga qaraganida burchak 45 ga teng. U egilganida vertikal ravishda ob'ektiv ob'ektivga tushadi va ob'ektiv linzalari orqali namunaga o'q uzadi, shunda namuna hayajonlanadi. Bu vaqtda ob'ektiv linza bevosita yorug'lik yig'uvchi vazifasini bajaradi. Shu bilan birga, filtrning uzun qismi (yashil, sariq, qizil va boshqalar) filtr uchun shaffofdir, shuning uchun u ob'ektiv linzalari yo'nalishida aks etmaydi va filtr qo'zg'atuvchi filtr plitasi sifatida ishlaydi, namunaning floresansi ko'rinadigan yorug'likning uzun to'lqinli mintaqasida bo'lgani uchun, filtrdan o'tib, kuzatish uchun okulyarga etib borishi mumkin, floresan tasvirning yorqinligi kattalashtirishning oshishi bilan ortadi va uzatilgan yorug'likdan kuchliroqdir. yuqori kattalashtirishdagi manba. Transmissiya yorug'lik manbai funktsiyasidan tashqari, u qalin bo'laklar, filtr membranalari, koloniyalar va to'qima madaniyati namunalari kabi shaffof va shaffof namunalarni bevosita kuzatish uchun ko'proq mos keladi. So'nggi yillarda ishlab chiqilgan yangi lyuminestsent mikroskoplar asosan epi-flüoresan mikroskoplar deb ataladigan epi-yorug'lik asboblaridan foydalanadi.
