Lazerli konfokal mikroskopiya (LSCM) tamoyillari
Lazerli konfokal mikroskop yorug'lik manbai orqasida joylashgan yoritish teshigidan va nuqta yoritilishiga va nuqtani aniqlashga erishish uchun detektor oldiga o'rnatilgan aniqlovchi teshikdan foydalanadi. Yorug'lik manbasidan chiqadigan yorug'lik namunaning fokus tekisligidagi yorug'lik teshigi orqali chiqariladigan yorug'lik nuqtasiga qaratiladi va bu nuqtadan chiqarilgan lyuminestsent aniqlanish teshigi ichida tasvirlanadi va bu nuqtadan tashqarida chiqadigan har qanday yorug'lik nurlanish teshigi orqali bloklanadi. aniqlash pin teshigi. Yoritish teshigi va aniqlash pin teshigi yoritilgan yoki aniqlangan nuqta uchun konjugatdir, shuning uchun aniqlangan nuqta konfokal nuqta va aniqlangan nuqta joylashgan tekislik konfokal tekislikdir. Kompyuter aniqlangan nuqtani kompyuter ekranida tasvir nuqtasi shaklida ko'rsatadi. To'liq tasvirni yaratish uchun optik yo'lda skanerlash tizimi namunaning fokus tekisligi bo'ylab skanerdan o'tkazadi va shu bilan to'liq konfokal tasvirni yaratadi. Tashuvchi bosqichi Z o'qi bo'ylab yuqoriga va pastga siljigan ekan, namunaning yangi darajasi konfokal tekislikka o'tkaziladi va Z o'qi davom etar ekan, namunaning yangi darajasi monitorda tasvirlanadi. harakat, namunaning turli darajadagi ketma-ket yorug'lik bilan kesilgan tasvirlari olinadi.
An'anaviy optik mikroskop dala yorug'lik manbasidan foydalanadi, namunadagi har bir nuqtaning tasviri qo'shni nuqtalardan yorug'likning diffraktsiyasi yoki tarqalishi bilan aralashadi; lazerli skanerlash konfokal mikroskop ichki fokus tekisligining har bir nuqtasida skanerlangan namunada nuqta yorug'lik manbasini hosil qilish uchun yoritilgan pin teshigi orqali lazer nuridan foydalanadi, nurlangan nuqtadagi namuna, aniqlovchi teshikni tasvirlash, pin teshigini aniqlash orqali yorug'lik ko'paytirish trubkasi (PMT) yoki sovuq elektrokuplli qurilma (cCCD) nuqtasidan so'ng, nuqta-nuqta yoki chiziqli qabul qilingan, kompyuter monitor ekranida lyuminestsent tasvir tezda hosil bo'ladi. Yoritish teshigi va ob'ektiv linzaning fokus tekisligiga nisbatan aniqlash pin teshigi konjugat bo'lib, fokus tekisligidagi nuqta bir vaqtning o'zida yorug'lik teshigi va emissiya pin teshigiga qaratilgan, fokus tekisligidan tashqaridagi nuqta aniqlanishda bo'lmaydi. tasvirda pinhole, shuning uchun olingan konfokal tasvir namunaning optik kesmasi bo'lib, oddiy mikroskop tasvirining noaniq kamchiliklarini bartaraf qiladi.
Asosiy printsipga ko'ra, lazerli konfokal mikroskop zamonaviy optik mikroskop bo'lib, u quyidagi yaxshilanishlarni amalga oshirish uchun texnologiyadan oddiy yorug'lik mikroskopidir.
1. Lazerni yorug'lik manbai sifatida foydalaning, chunki lazerning monoxromatikligi juda yaxshi, yorug'lik manbai nurining to'lqin uzunligi bir xil bo'lib, xromatik aberatsiyani tubdan yo'q qiladi.
2. Baffle kichik teshik bilan o'rtada joylashtirilgan ob'ektiv linzalari fokus tekisligida konfokal texnologiya foydalanish, adashgan nur blokirovka tashqari fokus tekisligi, sharsimon aberration bartaraf; va xromatik aberatsiyani yanada yo'q qiling.
3. Nuqtali skanerlash texnologiyasidan foydalangan holda lazerli konfokal mikroskop, namunani ikki o'lchovli yoki uch o'lchovli bo'shliqqa son-sanoqsiz nuqtalarga, juda kichik lazer nurlari (nuqta yorug'lik manbai) bilan nuqta-nuqta, chiziqli skanerlash tasviri va keyin orqali. butun tekislik yoki uch o'lchovli tasvirning mikrokompyuter kombinatsiyasi. An'anaviy yorug'lik mikroskopi bir martalik tasvirlash ostida dala yorug'lik manbai bo'lib, tasvirning har bir nuqtasidagi namunalar diffraksiyalangan yorug'lik va tarqoq yorug'lik aralashuvi nuqtasiga ulashgan bo'ladi. Ushbu ikki tasvirning ravshanligi va aniqligini taqqoslab bo'lmaydi.
4. Kompyuter yordamida optik signallarni olish va qayta ishlash va fotoko‘paytiruvchi trubka yordamida signallarni kuchaytirish.
Lazerli konfokal mikroskopda kompyuter kuzatish va videoyozuv uchun inson ko'zini yoki kamerani almashtiradi va olingan tasvirlar raqamlashtiriladi va tasvirlarning ravshanligini yaxshilash uchun kompyuterda qayta ishlanishi mumkin. Bundan tashqari, fotoko'paytiruvchi naychalardan foydalanish juda zaif signallarni kuchaytirishi mumkin, bu esa sezgirlikni sezilarli darajada yaxshilaydi. Yuqoridagi texnologiyalardan birgalikda foydalanish natijasida shuni aytish mumkinki, LSCM dunyodagi eng ilg'or mikroskopdir. Aytish mumkinki, LSCM mikroskop ishlab chiqarish texnologiyasi, fotoelektrik texnologiya, kompyuter texnologiyasi ** kombinatsiyasi bo'lib, zamonaviy texnologiya rivojlanishining muqarrar mahsulotidir.
