Floresan mikroskopning printsipi va tuzilishi
Floresan mikroskop qo'zg'atuvchi yorug'lik sifatida rang filtrlash tizimi orqali ma'lum to'lqin uzunligini (masalan, ultrabinafsha nur 3650 dyuym yoki binafsha ko'k yorug'lik 4200 dyuym) chiqaradigan va namunadagi lyuminestsent moddalarni qo'zg'atadigan yuqori yorug'lik samaradorligi nuqtali yorug'lik manbasidan foydalanadi. floresansning turli ranglarini chiqaradi. Shundan so'ng ob'ektiv va okulyar kattalashtirish orqali kuzatiladi. Shu tarzda, hatto zaif floresan bilan ham, u kuchli kontrastli fonlarda osongina tanib olinadi va juda sezgir bo'lib, asosan hujayra tuzilishi va funktsiyasini, shuningdek kimyoviy tarkibini o'rganish uchun ishlatiladi. Floresan mikroskopning asosiy tuzilishi oddiy optik mikroskop va ba'zi aksessuarlardan (masalan, lyuminestsent yorug'lik manbai, qo'zg'atuvchi filtr, bikromatik nur ajratuvchi va blokirovka filtri va boshqalar) iborat. Floresan yorug'lik manbalari - odatda ultra yuqori bosimli simob lampalaridan (50-200Vt) foydalaning, ular turli to'lqin uzunlikdagi yorug'likni chiqaradi. Biroq, har bir lyuminestsent moddada eng kuchli floresan hosil qiluvchi qo'zg'atuvchi yorug'lik to'lqin uzunligi mavjud, shuning uchun qo'zg'atuvchi yorug'likning faqat ma'lum bir to'lqin uzunligini o'tishi va yoritishi uchun qo'zg'atuvchi filtrlarni (odatda ultrabinafsha, binafsha, ko'k va yashil qo'zg'atuvchi filtrlar) qo'shish kerak. namuna, boshqa barcha yorug'likni o'zlashtirganda. Har bir modda hayajonlangan yorug'lik bilan nurlantirilgandan so'ng, juda qisqa vaqt ichida nurlanishdan ko'ra ko'proq to'lqin uzunligi bilan ko'rinadigan floresansni chiqaradi. Floresansning o'ziga xos xususiyati bor va odatda qo'zg'atuvchi nurdan zaifroqdir. Muayyan floresansni kuzatish uchun ob'ektiv linzalari orqasida blokirovka qiluvchi (yoki bostiruvchi) filtr qo'shilishi kerak. U ikkita funktsiyaga ega: birinchidan, floresansni bezovta qilmaslik va ko'zlarga shikast etkazmaslik uchun qo'zg'atuvchi nurni ko'zoynakga kiritishni o'zlashtiradi va bloklaydi; ikkinchidan, u ma'lum bir floresan rangini ko'rsatib, o'ziga xos floresanni tanlaydi va o'tishga imkon beradi. Ikkala turdagi filtrlar birgalikda foydalanish uchun tanlanishi kerak.
Flüoresan mikroskoplar optik yo'liga qarab ikki xil bo'ladi:
1. Transmissiya floresan mikroskopi: qo'zg'atuvchi yorug'lik manbai floresan qo'zg'atish uchun kondensator orqali namuna materiali orqali uzatiladi. Odatda ishlatiladigan qorong'u maydon yorug'lik kollektorlari yoki oddiy yorug'lik kollektorlari qo'zg'atuvchi yorug'lik va yon yorug'likni namunaga aylantirish uchun reflektorni sozlash uchun ishlatilishi mumkin. Bu nisbatan eskirgan floresan mikroskop. Uning afzalligi shundaki, lyuminestsent past kattalashtirishda kuchli, kamchiligi esa kattalashtirish kuchaygan sari floresansning zaiflashishi hisoblanadi. Shuning uchun kattaroq namunali materiallarni kuzatish yaxshiroqdir.
2. Tushayotgan nurli lyuminestsent mikroskop Bu flüoresan mikroskopning hozirgi zamonda ishlab chiqilgan yangi turi. Avvalgisidan farqli o'laroq, qo'zg'atuvchi yorug'lik ob'ektiv linzadan namunaning yuzasiga tushadi, yorug'lik kondensatori va floresan yig'ish uchun ob'ektiv linzalari bilan bir xil ob'ektiv linzalardan foydalanadi. Yengil uranga nisbatan 45 graduslik burchak ostida joylashgan optik yo'lga ikki rangli nurli ajratgich qo'shilishi kerak. Qo'zg'atuvchi yorug'lik ob'ektiv linzada aks etadi va namunaga to'planadi. Namuna tomonidan hosil qilingan floresans, shuningdek, ob'ektiv linzalari va qopqoq oynasi yuzasidan aks ettirilgan qo'zg'atuvchi yorug'lik bir vaqtning o'zida ob'ektiv linzaga kiradi va qo'zg'alish va floresansni ajratib, dikroik nurli ajratgichga qaytadi. Keyin qoldiq qo'zg'alish blokirovka qiluvchi filtr tomonidan so'riladi. Turli xil qo'zg'atuvchi filtrlar / ikki rangli nurli ajratgichlar / blokirovka qiluvchi filtr birikmalari ishlatilsa, ular turli xil floresan reaktsiya mahsulotlarining ehtiyojlarini qondirishi mumkin. Ushbu lyuminestsent mikroskopning afzalligi shundaki, ko'rish sohasining yoritilishi bir xil, tasvir aniq va kattalashtirish qanchalik katta bo'lsa, flüoresans shunchalik kuchli bo'ladi.
