Mikrobiologik mikroskop to'g'ridan-to'g'ri hisoblash
Eksperimental printsip
Gemositometr yordamida mikroskop ostida to'g'ridan-to'g'ri hisoblash keng tarqalgan mikrobial hisoblash usuli hisoblanadi. Ushbu usulning afzalligi shundaki, u intuitiv va tezdir. Tegishli suyultirilgan bakterial suspenziyani (yoki spora suspenziyasini) sanash kamerasiga slayd va gemositometrning qopqoq oynasi orasiga qo‘ying va mikroskop ostida hisoblang. Hisoblash kamerasining hajmi (0.1mm2) oʻzgarmas boʻlgani uchun uni mikroskop ostida kuzatilgan mikroorganizmlar soniga koʻra hajm birligidagi mikroorganizmlarning umumiy soniga aylantirish mumkin. Bu usul tirik va o'lik bakteriyalar yig'indisini hisoblaganligi sababli, u umumiy bakteriyalarni hisoblash usuli deb ham ataladi.
Gemositometr odatda maxsus shisha slayd bo'lib, uning ustida to'rtta oluk uchta platforma hosil qiladi. O'rtadagi platforma qisqa gorizontal truba bilan ikki yarmiga bo'lingan. Har tomondan platformada panjara o'yilgan. Har bir panjara to'qqizta katta kvadratga bo'lingan. O'rtadagi katta kvadrat - sanoq xonasi. Mikroorganizmlar hisoblash kamerasida hisoblanadi.
Sanoq xonasining masshtabida odatda ikkita xususiyat mavjud, biri katta kvadrat 16 ta oʻrta kvadratga, har bir oʻrta kvadrat esa 25 ta kichik kvadratga boʻlingan (Ⅷ-2-rasm); ikkinchisi katta kvadrat Kvadrat 25 ta o'rta kvadratga bo'lingan va har bir o'rta kvadrat 16 ta kichik kvadratga bo'lingan (rasm Ⅷ-1, C). Lekin qanday hisoblash taxtasidan qat’i nazar, har bir katta kvadratdagi kichik kvadratlar soni bir xil, ya’ni 16×25=400 kichik kvadrat.
Har bir katta kvadratning yon uzunligi 1 mm, har bir katta kvadratning maydoni 1 mm2. Qopqoq oynasi yopilgandan so'ng, slayd oynasi va qopqoq oynasi orasidagi balandlik 0.1 mm, shuning uchun hisoblash kamerasining hajmi 0.1mm3 ga teng.
Hisoblashda, odatda, beshta o'rta kvadratdagi bakteriyalarning umumiy sonini hisoblang, so'ngra har bir o'rta kvadratning o'rtacha qiymatini oling, so'ngra katta kvadratdagi bakteriyalarning umumiy sonini olish uchun 16 yoki 25 ga ko'paytiring va keyin ga aylantiring. 1 ml bakterial eritmadagi bakteriyalarning umumiy soni.
Laboratoriya jihozlari
Gemositometr, mikroskop, qopqoq, steril kapillyar;
Eksperimental materiallar
Saccharomyces cerevisiae suspenziyasi
Eksperimental protsedura (mikrob mikroskopining to'g'ridan-to'g'ri hisoblash usuli)
1. suyultirish
Saccharomyces cerevisiae suspenziyasini to'g'ri suyultiring. Agar bakterial eritma qalin bo'lmasa, uni suyultirish kerak emas.
2. Mikroskopik sanoq xonasi
Namunalarni qo'shishdan oldin, hisoblash plitasining hisoblash kamerasini mikroskopik tekshiruvdan o'tkazing. Agar axloqsizlik bo'lsa, hisoblashdan oldin uni tozalash kerak.
3. namuna qo'shing
Toza va quruq gemositometr plastinkasini qopqoq oynasi bilan yoping, so'ngra steril tor og'izli tomizgich yordamida qopqoq oynasining chetidan suyultirilgan Saccharomyces cerevisiae eritmasidan kichik bir tomchi tomizing (juda ko'p emas), shunda bakteriya eritmasi paydo bo'ladi. bo'shliq bo'ylab bo'shliqqa yaqin joylashgan. Kapillyar osmos hisoblash kamerasiga o'z-o'zidan kiradi va umumiy hisoblash kamerasi bakterial suyuqlik bilan to'ldirilishi mumkin. Havo pufakchalari bo'lmasligi uchun ehtiyot bo'ling.
4. mikroskop hisobi
5 daqiqa dam olgandan so'ng, gemositometrni mikroskop sahnasiga qo'ying, birinchi navbatda hisoblash kamerasining joylashishini aniqlash uchun kam quvvatli linzalardan foydalaning va keyin hisoblash uchun yuqori quvvatli linzaga o'ting. Agar sanashdan oldin bakterial eritma juda qalin yoki juda nozik ekanligi aniqlansa, hisoblashdan oldin suyultirishni qayta sozlash kerak. Umumiy namuna suyultirish taxminan talab qiladi
5-10 ta katak mos keladi. Har bir sanoq kamerasi sanash uchun 5 ta o'rta katakdagi (ixtiyoriy 4 burchak va markaziy panjara) bakteriyalarni tanlaydi. To'r chizig'idagi bakteriyalar odatda faqat yuqori va o'ng chiziqlarda hisoblanadi. Xamirturush kurtaklari paydo bo'lganda, kurtak tanasining kattaligi ona hujayraning yarmiga yetganda, ikkita bakteriyani hisoblang. Ikkita hisoblash kamerasida hisoblangan qiymatlardan namunaning bakterial tarkibini hisoblash uchun namunani hisoblang.
5. Gemositometrni tozalash
Foydalanishdan so'ng, muslukdagi qon hujayralarini hisoblash plitasini suv oqimi bilan yuving, uni qattiq narsalar bilan yuvmang va yuvgandan keyin o'zingiz yoki fen bilan quriting. Mikroskopik tekshirish, har bir hujayrada qoldiq bakteriyalar yoki boshqa cho'kindi moddalar mavjudligini kuzating. Agar u toza bo'lmasa, toza bo'lgunga qadar uni qayta-qayta yuvish kerak.
