Konfokal floresan mikroskopni bilish
Konfokal floresan mikroskopiyaning asosiy printsipi: namunani nurlantirish uchun nuqtali yorug'lik manbai ishlatiladi, fokus tekisligida kichik, aniq belgilangan yorug'lik nuqtasini hosil qiladi; nurlanishdan keyin shu nuqtadan chiqarilgan lyuminestsent ob'ektiv ob'ektiv tomonidan yig'iladi va dastlabki nurlanish yorug'lik yo'li bo'ylab ikki tomonlama xromatik oynadan iborat bo'lgan nur ajratgichga qaytariladi. Nurni ajratuvchi floresansni to'g'ridan-to'g'ri detektorga yuboradi. Yorug'lik manbai va detektorning har biri oldida mos ravishda yoritish teshigi va aniqlash teshigi deb ataladigan pin teshigi mavjud. Ikkalasi ham bir xil geometriyaga ega, taxminan 100-200 nm va fokus tekisligidagi yorug'lik nuqtasiga nisbatan konjugatdir, ya'ni yorug'lik nuqtasi bir qator linzalardan o'tadi va oxir-oqibat ikkala yorituvchiga qaratilishi mumkin. va detektor teshiklari. Shunday qilib, fokus tekisligidan keladigan yorug'lik zond teshigi ichida birlashishi mumkin, shu bilan birga fokus tekisligining yuqoridan yoki ostidan tarqalgan yorug'lik zond teshigidan tashqarida bloklanadi va tasvirni olish mumkin emas. Lazer namuna nuqtasini nuqtama-nuqta skanerdan o'tkazadi va pin teshigini aniqlagandan so'ng, fotoko'paytiruvchi trubka, shuningdek, raqamli signalga aylantiriladigan va kompyuterga uzatiladigan mos keladigan yorug'lik nuqtasining konfokal tasvirini oladi va nihoyat aniq bir nuqtaga aylanadi. ekrandagi butun fokus tekisligining konfokal tasviri.
Har bir fokus tekisligi tasviri aslida namunaning optik kesimidir va bu optik kesma har doim optik varaq sifatida ham tanilgan ma'lum bir qalinlikka ega. Fokus nuqtasidagi yorug'lik intensivligi fokus bo'lmagan nuqtaga qaraganda ancha katta bo'lganligi sababli va fokal bo'lmagan tekislikdagi yorug'lik pin teshigi orqali filtrlanganligi sababli, konfokal tizimning maydon chuqurligi nolga teng bo'ladi va skanerlash. Z-o'qi yo'nalishi bo'ylab optik tomografiya fokus nuqtasida kuzatiladigan namunaning ikki o'lchovli optik tilimini yaratishga imkon beradi. XY tekisligi (fokus tekisligi) skanerlashni Z-o'qi (optik o'q) skanerlash bilan birlashtirgan holda, namunaning uch o'lchovli tasvirini ixtisoslashtirilgan kompyuter dasturlari tomonidan qayta ishlangan ikki o'lchovli tasvirlarning ketma-ket qatlamlarini to'plash orqali olish mumkin.
Bu shuni anglatadiki, aniqlash pin teshigi va yorug'lik manbasi teshigi doimo bir xil nuqtaga qaratilgan, shuning uchun fokus tekisligidan tashqarida qo'zg'atilgan floresans aniqlash teshigiga kira olmaydi.
Lazerli konfokalning ishlash printsipi oddiygina ifodalanganki, u raqamli tasvirni olish va qayta ishlash tizimini amalga oshirish uchun kompyuter boshqaruvi orqali an'anaviy floresan mikroskop tasviri, qo'shimcha lazerli skanerlash moslamasi va konjugat fokuslash moslamasi asosida lazerni yorug'lik manbai sifatida ishlatadi.
