Konfokal floresan mikroskopiya haqida ma'lumot
Konfokal floresan mikroskopiyaning asosiy printsipi: namunani nurlantirish uchun nuqtali yorug'lik manbai ishlatiladi va fokus tekisligida aniq belgilangan kichik yorug'lik nuqtasi hosil bo'ladi. ajratuvchilardan tashkil topgan. Nurni ajratuvchi floresansni to'g'ridan-to'g'ri detektorga yuboradi. Yorug'lik manbai va detektor oldida pin teshigi mavjud bo'lib, ular mos ravishda yoritish teshigi va aniqlash teshigi deb ataladi. Ikkalasining geometrik kattaligi bir xil, taxminan 100-200nm; fokus tekisligidagi yorug'lik nuqtasiga nisbatan, ikkalasi konjugat, ya'ni yorug'lik nuqtasi bir qator linzalardan o'tadi va nihoyat, bir vaqtning o'zida yorug'lik teshigi va aniqlash pin teshigiga qaratilishi mumkin. Shunday qilib, fokus tekisligidan keladigan yorug'lik aniqlash teshigi doirasida birlashtirilishi mumkin, shu bilan birga fokus tekisligining yuqoridan yoki ostidan tarqalgan yorug'lik aniqlash teshigidan tashqarida bloklanadi va tasvirni olish mumkin emas. Lazer namunani nuqtama-nuqta skanerdan o'tkazadi va pin teshigini aniqlagandan so'ng, fotoko'paytiruvchi trubka ham mos keladigan yorug'lik nuqtasining konfokal tasvirini oladi, bu raqamli signalga aylantiriladi va kompyuterga uzatiladi va nihoyat aniq tasvirga yig'iladi. ekrandagi butun fokus tekisligining konfokal tasviri.
Har bir fokus tekisligi tasviri aslida namunaning optik kesimidir va bu optik kesma har doim ma'lum bir qalinlikka ega, shuningdek, optik nozik qism deb ham ataladi. Fokus nuqtasidagi yorug'lik intensivligi fokussiz nuqtadagi yorug'likdan ancha katta bo'lgani uchun va fokus bo'lmagan tekislikdagi yorug'lik pin teshigi tomonidan filtrlanganligi sababli, konfokal tizimning maydon chuqurligi taxminan nolga teng va Z bo'ylab skanerlash. -eksa optik tomografiyani amalga oshirishi mumkin, namunaning fokuslangan joyida ikki o'lchovli optik qismni kuzating. XY tekisligi (fokal tekisligi) skanerlashni Z-o'qi (optik o'q) skanerlash bilan birlashtirib, namunaning uch o'lchovli tasvirini doimiy qatlamlarning ikki o'lchovli tasvirlarini to'plash va maxsus kompyuter dasturlari yordamida qayta ishlash orqali olish mumkin.
