Floresan mikroskopiya haqida qancha bilasiz
Floresan mikroskoplari odatda qo'zg'atuvchi yorug'lik manbalari sifatida yuqori zichlikdagi simob lampalaridan foydalanadilar. Filtrlar kiruvchi yorug'likni filtrlash uchun ishlatiladi, faqat floroforni qo'zg'atadigan yuqori intensivlikdagi sof yorug'lik qoladi. Monoxromatik yorug'lik namunani ob'ektiv linzalari orqali nurlantirgandan so'ng, namuna yorug'lik (flüoresans) chiqarish uchun hayajonlanadi va ham floresans, ham qo'zg'atuvchi yorug'lik ob'ektiv linzalarining optik yo'li bo'ylab qaytib keladi. Bunday holda, qo'zg'atuvchi nurni filtrlash uchun dikroik oyna kerak. , biz ko'rishimiz kerak bo'lgan faqat floresansga ruxsat berish.
Bu lyuminestsent mikroskopning yorug'lik yo'li bo'ylab okulyarga etib boradi va keyin bizning ko'zimizga kiradi, bu erda biz flüorofor chiqaradigan floresansni ko'rishimiz mumkin.
Flüoresan mikroskopni oldindan tekshirish va sozlash:
(1) Har bir lyuminestsent kuzatuvdan oldin floresan qurilmaning filament hizalanishini, optik yo'l fokusini, diafragma diafragmasini va maydon diafragma sozlamalarini muntazam ravishda tekshirish kerak.
(2) Konverterga kerakli lyuminestsent qo'zg'alish / emissiya filtri moslamasi o'rnatilganmi, floresan mikroskop ob'ektiv linzalari to'g'ri tuzilganmi va ob'ektiv linzasining old linzalaridagi yog 'qoralari va changni olib tashlang.
(3) Agar uzatilgan yorug'likning fazali kontrastli kuzatuvi bir vaqtning o'zida amalga oshirilsa, ob'ektiv linzaga qarama-qarshi bo'lgan kondanser markazi va faza kontrasti halqasining konjugatsiyasini tekshirish kerak.
(4) Namuna tashuvchisi (slayd oynasi, qopqoq oynasi va boshqa idishlar) suyuqlik yoki chang bilan qoplangan yoki yo'qligini va qalinligi ob'ektiv linzalarning kalibrlangan ish masofasi oralig'ida ekanligini tekshiring. Dilimlangan namuna juda qalin bo'lmasligi kerak, yaxshisi 10 mkm dan kam yoki teng bo'lishi kerak.
(5) Yoritish manbai ultrabinafsha nurlarni o'z ichiga olganligi sababli, ultrabinafsha nurlarning retinaga zarar etkazishini oldini olish uchun sahnaning old qismiga jigarrang yorug'likdan himoya qiluvchi plastinka qo'yilgan.
(6) Voltajning beqarorligi yuqori bosimli simob chiroqning ishlash muddatini qisqartiradi va yorug'lik manbai quvvat manbai kuchlanish stabilizatori bilan jihozlangan.
(7) simob chiroqning ishlash muddatini uzaytirish uchun uni yoqilgandan keyin 15 daqiqadan so'ng o'chirish mumkin; simob chiroqning lyuminestsent quvvati o'chirilgandan so'ng, simob bug'ining sovishi va asl holatiga qaytishi uchun qayta ishga tushirish uchun kamida 10 daqiqa kutish kerak, aks holda chiroqning ishlash muddati ta'sir qiladi.
Floresan mikroskop yordamida tasvirni kuzatish:
(1) Floresan yorug'lik manbasini yoqqandan so'ng taxminan 5-10 minut o'tgach, qo'zg'atuvchi yorug'likning intensivligi barqaror bo'ladi va namuna kuzatish uchun yuklanadi; Ob'ektlarni diqqatni jamlash va qidirish jarayonida haddan tashqari qo'zg'aluvchan yorug'lik tufayli namunaning floresan so'nishining oldini olish uchun birinchi navbatda floresan mikroskopni kichraytiring. Qo'zg'alish nurini diafragma diafragma bilan o'rtacha intensivlikka sozlang yoki ND filtrini qo'shing va namuna bosqichini muntazam ravishda siljiting. Oyna tasvirini tasdiqlaganingizdan so'ng, tortishish va yozish uchun floresan holatiga sozlang.
(2) Tasvir sifati pastligi uchun sozlashlar. Namuna tayyorlash omillariga qo'shimcha ravishda, zarur tuzatishlar kiritilishi mumkin:
① DIC aksessuarlari, ND filtrlari va boshqalar kabi tasvirlash optik yo'liga yorug'likdan himoya qiluvchi yoki yorug'likni cheklovchi qurilmalarni kiritmang.
②Flüoresan mikroskopning qabul qiluvchi fokusi va diafragma diafragmasining oʻlchamini qayta sozlang.
③ Floresan mikroskop ob'ektiv linzalarining qamrov farqini to'g'rilash halqasini ehtiyotkorlik bilan sozlang.
Floresan mikroskopiyani qo'llash nuqtalari
Floresan mikroskopida "aktinik flüoresans" tasviri qo'llaniladi. Agar tanlangan qo'zg'alish to'lqin uzunligi yalang'och ko'zga ko'rinmaydigan ultrabinafsha rangga yaqin mintaqada (320-400nm) bo'lsa, flüoresansning emissiya spektri ham oddiy yorug'lik oynasi yorug'lik manbalarining o'rtacha to'lqin uzunligidan qisqaroq bo'ladi. yaxshilash. Yuqori energiyali fotonlar elektronlar bilan to'qnashib, elektronlarning asosiy holatdan qo'zg'aluvchan holatga o'tishiga olib keladi. Qo'zg'algan holatdagi elektronlar juda beqaror va asosiy holatga qaytadi. Bu jarayonda issiqlik energiyasining bir qismi sarflanadi va yangi fotonlar chiqariladi. Yangi foton asl fotonga qaraganda kamroq energiyaga ega va shuning uchun uzunroq to'lqin uzunligiga ega. Yangi foton to'lqin uzunligi tushayotgan yorug'likning foton to'lqin uzunligidan farq qilganligi sababli, turli to'lqin uzunliklariga ega bo'lgan ikkita yorug'lik nurlari ma'lum bir optik ishlov berish usuli bilan ajratiladi, shuning uchun biz faqat chiqarilgan yangi fotonlarni (fluoresans signalini) ko'ramiz, ya'ni, floresan mikroskop floresan tasvirlarni ko'radi.
