Mikroskop ostida mikrob hujayralarining morfologiyasi qanday kuzatiladi?
Mikroskoplar yalang'och ko'z bilan ko'rinmaydigan jilmaygan narsalarni ko'rish uchun ixtiro qilingan. Mikroorganizmlar juda kichik, shuning uchun ularni mikroskop yordamida kattalashtirish va kuzatish kerak. Bundan tashqari, mikroorganizmlarning ko'p turlari mavjud, shuning uchun asosan optik mikroskoplarning ko'pchiligi mikroorganizmlarni kuzatishi mumkin. Keyingi savol - qanday mikroorganizmlarni kuzatish va tahlil qilish uchun qanday mikroskopdan foydalanish kerak. Mikrob morfologiyasini kuzatish uchun ishlatilishi mumkin bo'lgan umumiy mikroskoplarga biologik mikroskoplar, fazali kontrastli mikroskoplar, teskari mikroskoplar, floresan mikroskoplar, konfokal mikroskoplar va boshqalar kiradi.
Quyida mikroorganizmlarni kuzatish uchun ishlatiladigan turli mikroskoplar tasvirlangan:
1. Oddiy optik mikroskop yorug'lik manbai sifatida tabiiy yorug'lik yoki yorug'likdan foydalanadi va uning to'lqin uzunligi taxminan 0,4 mkm. Mikroskopning aniqlik qobiliyati to'lqin uzunligining yarmiga teng, ya'ni 0,2 mkm, oddiy ko'zga ko'rinadigan eng kichik tasvir esa 0,2 mm. Shuning uchun 1000 marta kattalashtirish uchun moyli (immersion) oynadan foydalanish 0,2 mkm zarrachalarni oddiy ko‘zga ko‘rinadigan 0,2 mm gacha kattalashtirishi mumkin. Oddiy optik mikroskoplardan bakteriyalar, aktinomitsetalar va zamburug'larni kuzatish uchun foydalanish mumkin.
2. Darkfield mikroskopiyasi odatda bo'yalmagan mikrob morfologiyasi va harakatini kuzatish uchun ishlatiladi. Oddiy mikroskopga qorong'u maydon kondensatori o'rnatilgandan so'ng, yorug'lik to'g'ridan-to'g'ri o'rtadan kira olmaydi va ko'rish maydoni qorong'i bo'ladi. Namuna kondensatorning chetidan qiyshiq yorug'likni qabul qilganda, u tarqalib ketishi mumkin, shuning uchun qorong'u dala fonida bakteriyalar yoki spiroketalar kabi yorqin mikroorganizmlar kuzatilishi mumkin.
3. Fazali kontrastli mikroskop Fazali kontrastli mikroskop to'g'ridan-to'g'ri yorug'likning yorug'lik fazasini va amplitudasini o'zgartirish va yorug'lik fazasining farqini yorug'lik intensivligi farqiga aylantirish uchun fazalar farqi plastinkasining yorug'lik effektidan foydalanadi. Fazali kontrastli mikroskopda yorug'lik bo'yalmagan namunadan o'tganda yorug'lik fazasidagi farq namunaning turli qismlari zichligining bir-biriga mos kelmasligidan kelib chiqadi va mikroorganizmlarning morfologiyasi, ichki tuzilishi va harakat rejimini kuzatish mumkin.
4. Floresan mikroskop Floresan mikroskop asosan oddiy optik mikroskop bilan bir xil bo'lib, asosiy farq yorug'lik manbai, filtr va kondensatordir. Hozirgi vaqtda ularning ko'pchiligi epi-yorug'lik moslamalaridan foydalanadi va yuqori bosimli simob lampalari odatda ultrabinafsha yoki ko'k-binafsha nurlar chiqarishi mumkin bo'lgan yorug'lik manbalari sifatida ishlatiladi. Ikkita turdagi filtrlar mavjud: qo'zg'atuvchi filtr va assimilyatsiya filtri. Umumiy yorqin maydon kondensatorlariga qo'shimcha ravishda, qorong'u maydon kondensatorlari floresan va fon o'rtasidagi kontrastni kuchaytirish uchun ko'k nurdan foydalangan holda floresan mikroskoplarda ham qo'llanilishi mumkin. Ushbu usul floresan pigmentlar bilan bo'yalgan yoki floresan antikorlar bilan birlashtirilgan bakteriyalarni aniqlash yoki identifikatsiya qilish uchun qo'llaniladi.
5. Elektron mikroskoplar yorug'lik manbai sifatida elektron oqimidan foydalanadi va to'lqin uzunligi ko'rinadigan yorug'likdan o'n minglab marta farq qiladi, bu piksellar sonini sezilarli darajada yaxshilaydi. Bundan tashqari, optik kuchaytirish tizimi sifatida magnit lasandan foydalanadi va kattalashtirish o'n minglab yoki yuz minglab marta yetishi mumkin. Ko'pincha virus zarralari va bakterial ultrastrukturani kuzatish uchun ishlatiladi.
Bo'yalmagan mikrob namunalarini kuzatish:
Bo'yalmagan namunalar odatda bakterial morfologiya, quvvat va harakatni kuzatish uchun ishlatilishi mumkin. Bakteriyalar rangsiz va bo'yalmagan holda shaffof bo'lib, mikroskop ostida asosan bakteriyalarning sinishi ko'rsatkichi va atrof-muhit o'rtasidagi farq orqali kuzatiladi. Flagellali bakteriyalar kuchli harakat qiladi, flagellasiz bakteriyalar esa tartibsiz Broun harakatini ko'rsatadi. Treponema pallidum, Leptospira va Campylobacter kabi tirik bakteriyalar diagnostik ahamiyatga ega bo'lgan o'ziga xos shakl va harakat shakllariga ega. Tez-tez ishlatiladigan usullar bosimni tushirish usuli, marjonlarni tushirish usuli va kapillyar usuldir.
1. Osilib tushirish usuli bilan toza botiq oynaning botiq teshigi atrofiga vazelin surting, bakterial suspenziya halqasini olish uchun emlash halqasidan foydalaning va uni qopqoq oynasining o'rtasiga qo'ying, so'ngra botiq oynaning botiq teshigi bilan tekislang. qopqoq oynasining o'rtasiga tushib, uni yoping, so'ng uni tezda aylantiring, botiq teshik chetidagi vazelinga mahkam yopishishi uchun qopqoq oynasini ozgina bosing va yuqori kattalashtirish mikroskopida (yoki) kuzating. qorong'u maydon).
2. Bakterial suspenziyadan emlash halqasi bilan halqani oling va uni bosimni pasaytirish usuli bilan toza shisha slaydning o'rtasiga qo'ying va bakterial suspenziya pufakchalari va to'lib ketishiga yo'l qo'ymaslik uchun qopqoq oynasi bilan muloyimlik bilan yoping. . Bir necha soniya harakatsiz turgandan so'ng, yorug' maydonda (yoki qorong'i maydonda) yuqori quvvatli mikroskop ostida kuzating.
3. Kapillyar usul asosan anaerob bakteriyalar kinetikasini tekshirish uchun ishlatiladi. Odatda 60~70 mm uzunlikni tanlang. Anaerob bakteriyalar suspenziyasini 0,{4}},0 mm teshikka ega kapillyar orqali o'tkazgandan so'ng, kapillyarning ikki uchini olov bilan yoping. Kapillyar shisha slaydga plastik qog'oz bilan o'rnatildi va qorong'i maydonda yuqori quvvatli ob'ektiv ostida kuzatildi.
Bo'yalgan mikrob namunalarini mikroskop bilan kuzatish:
Bakteriya namunasi bo'yalganidan so'ng, bakteriyalar va atrof-muhit o'rtasidagi rangning keskin kontrasti tufayli bakteriyalarning morfologik xususiyatlari (masalan, o'lchami, shakli, joylashuvi va boshqalar) bakteriyalar va ba'zi maxsus tuzilmalar (bunday). kapsulalar, flagellalar, sporlar va boshqalar kabi) oddiy optik mikroskop ostida aniq kuzatilishi mumkin va bakteriyalarni bo'yash reaktivligiga ko'ra tasniflash va aniqlash mumkin.
(1) Bakterial bo'yashning umumiy tartibi Bakterial bo'yashning umumiy tartibi: surtish (quritish) - fiksatsiya - bo'yash.
1. Smear Qon, sekretsiya, ekskretsiya, ponksiyon suyuqligi va suyuqlik kulturasini tayyorlash va shisha slaydlarga to'g'ridan-to'g'ri yupqa plyonka surtish; otopsiya yoki yuqtirilgan hayvon to'qimalari, namuna olish uchun lezyonni paxta sumkasi bilan surting. Qattiq muhitda bakterial koloniyalar yoki maysazorlarni tayyorlash uchun avval oddiy sho'r suvli halqani olish uchun emlash halqasidan foydalaning va uni shisha slaydning o'rtasiga qo'ying, so'ngra oz miqdorda kultura olish va maydalash uchun steril emlash halqasidan foydalaning. uni oddiy sho'r suvda bir tekis qilib, 1 sm2 qoplangan sirtga yoyib, xona haroratida tabiiy ravishda quriting yoki masofadan turib asta-sekin quriting.
2. Fiksatsiyaning maqsadi bakteriyalarni o'ldirish, bakteriya oqsili va tuzilishini koagulyatsiya qilish va bo'yashni osonlashtirishdir; yuvish paytida suv bilan yuvilib ketmaslik uchun bakteriyalarni slaydga yopishib olishiga yordam bering; bakteriyalarning bo'yoqlarga o'tkazuvchanligini o'zgartiring, bu bakterial hujayra ichidagi tuzilmalarni bo'yash uchun foydalidir. Odatda olov bilan qizdirish yo'li bilan o'rnatiladi va quritilgan smear tezda olovdan 3 marta o'tadi. Slaydga tegsa, qo'lning orqa qismidagi terini kuydirmaslik yaxshiroqdir.
3. Bo'yash Turli tekshirish maqsadlariga ko'ra, bo'yash uchun turli xil bo'yash usullarini tanlang. Bo'yash paytida, qoplamani oshirish uchun bo'yoq eritmasini tomchilab qo'shing.
4. Mordant Bo'yoq va bo'yalgan narsa o'rtasidagi yaqinlikni kuchaytiruvchi, bo'yoqni bo'yalgan ob'ektga mahkamlash va hujayra membranasining o'tkazuvchanligini o'zgartirishga olib keladigan har qanday moddaga mordant deyiladi. Odatda alum, tanin kislotasi, metall tuzlari va yod va boshqalar ishlatiladi va rang berishni targ'ib qilish uchun isitish ham ishlatiladi. Mordantlar birlamchi bo'yash va qarama-qarshi bo'yash o'rtasida qo'llanilishi mumkin, shuningdek, fiksatsiyadan keyin yoki fiksator va bo'yash tarkibida bo'lishi mumkin.
5. Rangsizlantirish Bo'yalgan ob'ektning rangini yo'qotadigan har qanday kimyoviy vosita rangsizlantiruvchi deyiladi. Dekolorizatsiya sifatida odatda etanol, aseton va boshqalar ishlatiladi. Rangsizlantiruvchi vosita bakteriyalar va bo'yoqlar birikmasining barqarorlik darajasini aniqlay oladi, bu esa differentsial bo'yash uchun ishlatilishi mumkin.
6. Qarama-qarshi bo'yoq Bakteriyalar yoki ularning rangsizlangan tuzilmalari kuzatishni osonlashtirish uchun ko'pincha qarama-qarshi bo'yoq eritmasi bilan bo'yaladi. Qarama-qarshi eritmaning rangi keskin kontrast hosil qilish uchun asosiy bo'yash eritmasidan farq qiladi. Qarama-qarshi bo'yoq juda kuchli bo'lmasligi kerak, shuning uchun dastlabki binoni rangini yashirmaslik kerak.
