Floresan mikroskopiya an'anaviy mikroskopiyadan qanday farq qiladi
Men yaqinda sichqonlarning muzlatilgan qismlarini yasashga harakat qildim va endi men kiritgan virus miyaning kerakli sohasiga kirib yoki yo‘qligini bilish uchun floresan mikroskopdan foydalanishim kerak. Floresan mikroskopiyaning ba'zi asosiy tamoyillarini qisqacha o'rganish kerak va men ularni bu erda ham baham ko'raman.
Floresan mikroskopi tekshirilayotgan ob'ektni yoritish uchun yorug'lik manbai sifatida ultrabinafsha nurlardan foydalanadi, ob'ekt yorug'lik manbasini chiqaradi va keyin mikroskop ostida ob'ektni kuzatadi. Asosan immunofluoresans hujayralari uchun ishlatiladi, u yorug'lik manbai, filtr plastinka tizimi va ko'zoynak va ob'ektiv linzalarni kattalashtirish orqali namunaning floresan tasvirini kuzatish uchun optik tizimdan iborat. Keling, ushbu floresan mikroskop va oddiy optik mikroskop o'rtasidagi farqni ko'rib chiqaylik.
1. Yoritish usullari bo'yicha
Floresan mikroskopning yoritish usuli odatda tushuvchi nur usulidan foydalanadi, ya'ni yorug'lik manbai ob'ektiv linzalari orqali sinov namunasiga proektsiyalanadi.
2. Rezolyutsiya jihatidan
Floresan mikroskopida yorug'lik manbai sifatida ultrabinafsha nurlar ishlatiladi, to'lqin uzunligi nisbatan qisqa, lekin oddiy optik mikroskoplarga qaraganda yuqori aniqlikda.
3. Filtrdagi farqlar
Floresan mikroskop ikkita maxsus filtrdan foydalanadi, ulardan biri yorug'lik manbai oldida ko'rinadigan yorug'likni filtrlash uchun, ikkinchisi ob'ektiv va okulyar o'rtasida ultrabinafsha nurni filtrlash uchun ko'zni himoya qiladi.
Floresan mikroskopiyasi ham optik mikroskopning bir turi bo'lib, asosan flüoresan mikroskop tomonidan qo'zg'atilgan to'lqin uzunligi qisqa bo'lib, flüoresan mikroskopiya va oddiy mikroskopning tuzilishi va ishlatilishidagi farqlarga olib keladi. Ko'pgina lyuminestsent mikroskoplar zaif nurni ushlab turishning yaxshi funktsiyasiga ega, shuning uchun ularning tasvirlash qobiliyati juda zaif floresan ostida ham yaxshi. Bundan tashqari, so'nggi yillarda floresan mikroskopiyaning doimiy yaxshilanishi bilan shovqin ham sezilarli darajada kamaydi. Shuning uchun, ko'proq floresan mikroskoplar qo'llaniladi.
Ikki fotonli floresan mikroskopiyaga oid bilimlar
Ikki fotonli qo'zg'alishning asosiy printsipi shundaki, yuqori foton zichligida lyuminestsent molekulalar bir vaqtning o'zida ikkita uzun to'lqin uzunlikdagi fotonni o'zlashtira oladi va qo'zg'aluvchan holat deb ataladigan qisqa vaqtdan keyin qisqaroq to'lqin uzunligi foton chiqaradi; Uning ta'siri floresan molekulalarni qo'zg'atish uchun to'lqin uzunligining yarmi uzun to'lqin uzunligiga ega bo'lgan fotonni ishlatish bilan bir xil. Ikki foton qo'zg'alishi yuqori foton zichligini talab qiladi va hujayralarga zarar yetkazmaslik uchun ikki fotonli mikroskopda yuqori energiyali rejim qulflangan impuls lazeridan foydalaniladi. Ushbu turdagi lazer tomonidan chiqariladigan lazer yuqori cho'qqi energiyasiga va past o'rtacha energiyaga ega, pulsning kengligi atigi 100 femtosekund va chastotasi 80 dan 100 megahertzgacha. Impulsli lazerning fotonlarini fokuslash uchun yuqori raqamli diafragma ob'ektividan foydalanilganda, ob'ektivning fokus nuqtasidagi foton zichligi eng yuqori bo'ladi va ikki fotonli qo'zg'alish faqat ob'ektivning markazlashtirilgan nuqtasida sodir bo'ladi. Shuning uchun ikki fotonli mikroskop konfokal teshiklarni talab qilmaydi, bu esa flüoresansni aniqlash samaradorligini oshiradi.
Umumiy floresan hodisalarida, qo'zg'alishning past foton zichligi tufayli, floresan molekula bir vaqtning o'zida faqat bitta fotonni o'zlashtirishi mumkin va keyin radiatsiya o'tish orqali bitta floresan fotonni chiqaradi, bu bitta fotonli floresans deb ataladi. Yorug'lik manbai sifatida lazerdan foydalangan holda lyuminestsent qo'zg'alish jarayoni uchun ikki foton yoki hatto ko'p fotonli floresans hodisalari paydo bo'lishi mumkin. Hozirgi vaqtda qo'zg'atuvchi yorug'lik manbai yuqori intensivlikka ega va foton zichligi floresan molekulalarning bir vaqtning o'zida ikkita fotonni o'zlashtirishi uchun talabga javob beradi. Oddiy lazerni qo'zg'atuvchi yorug'lik manbai sifatida ishlatish jarayonida foton zichligi hali ham ikki fotonli yutilish hodisasini yaratish uchun etarli emas. Odatda, femtosekundli puls lazerlari qo'llaniladi va ularning bir lahzali kuchi megavatt darajasiga yetishi mumkin. Shuning uchun, ikki fotonli floresansning to'lqin uzunligi qo'zg'alishdan ko'ra qisqaroqdir, bu yarim qo'zg'alish to'lqin uzunligi qo'zg'alish natijasida hosil bo'lgan effektga teng.
