Optik mikroskopning floresan kuzatuvi
Floresansiya deganda lyuminestsent moddaning ma'lum bir to'lqin uzunligi nuri bilan nurlantirilganda deyarli bir vaqtning o'zida kattaroq to'lqin uzunligiga ega yorug'lik chiqarish jarayoni tushuniladi (1-rasm). Muayyan to'lqin uzunligidagi yorug'lik (qo'zg'alish to'lqin uzunligi) molekulaga, masalan, florofordagi yorug'likka tushganda, foton energiyasi molekula elektronlari tomonidan so'riladi. Keyinchalik, elektronlar asosiy holatdan (S0) yuqori energiya darajasiga, hayajonlangan holatga (S1') o'tadi. Bu jarayon qo'zg'alish① deb ataladi. Elektron hayajonlangan holatda 10-9–10-8 soniya davomida qoladi, bu vaqt davomida elektron bir oz energiyani yo'qotadi②. Elektronlarning qo'zg'alilgan holatdan (S1) chiqib, asosiy holatga qaytishi jarayonida③ qo'zg'alish jarayonida so'rilgan qolgan energiya ajralib chiqadi.
Floresan Jablonskiy diagrammasi
Floresan molekulasining qo'zg'alish holatida yashash vaqti odatda nanosekund darajasida bo'lgan floresan umri bo'lib, flüoresan molekulasining o'ziga xos xususiyati hisoblanadi. Flüoresansning umr bo'yi tasvirlash texnologiyasidan foydalanadigan Fluoresans umr bo'yi tasvirlash (FLIM) flüoresans intensivligini ko'rishdan tashqari yanada chuqurroq funktsional o'lchovlarni amalga oshirishi va molekulyar konformatsiyani, molekulalararo o'zaro ta'sirlarni va molekulalarning mikro muhitini va hokazolarni olishi mumkin. Qiyin bo'lgan ma'lumot an'anaviy optik tasvir yordamida olish.
Floresansiyaning yana bir muhim xususiyati - Stokes siljishi, qo'zg'alish va emissiya cho'qqilari orasidagi to'lqin uzunligi farqi (2-rasm). Odatda emissiya to'lqin uzunligi qo'zg'alish to'lqin uzunligidan uzunroqdir. Buning sababi shundaki, floresan modda qo'zg'atilgandan keyin va fotonlarni chiqarishdan oldin elektronlar gevşeme jarayonida energiyaning bir qismini yo'qotadi. Kattaroq Stokes siljishiga ega lyuminestsent moddalarni floresan mikroskop ostida kuzatish osonroq.
floresan mikroskop
Floresan mikroskop - kuzatish va tasvirlash uchun floresans xususiyatlaridan foydalanadigan optik mikroskop va hujayra biologiyasi, neyrobiologiya, botanika, mikrobiologiya, patologiya va genetika kabi turli sohalarda keng qo'llaniladi. Floresan tasvirlash yuqori sezuvchanlik va yuqori o'ziga xoslik afzalliklariga ega va to'qimalar va hujayralardagi o'ziga xos oqsillar va organellalarning tarqalishini kuzatish, kolokalizatsiya va o'zaro ta'sirni o'rganish, ion kontsentratsiyasining o'zgarishi kabi hayotiy dinamik jarayonlarni kuzatish uchun juda mos keladi. , va boshqalar.
Hujayralardagi ko'pchilik molekulalar floresan nurlanmaydi va agar siz ularni ko'rmoqchi bo'lsangiz, ularni lyuminestsent bilan belgilaysiz. To'g'ridan-to'g'ri yorliqlash (masalan, DNKni belgilash uchun DAPI dan foydalanish) yoki antikorlarning antigen bog'lash xususiyatlaridan foydalangan holda immuno-bo'yash yoki maqsadli oqsillarni belgilash uchun floresan oqsillarni (GFP, yashil floresan oqsil kabi) ishlatish kabi lyuminestsent yorliqlashning ko'plab usullari mavjud. , va teskari bog'lanish. sintetik bo'yoqlar (masalan, Fura-2) va boshqalar.
Invertli floresan mikroskop MF53-N
Hozirgi vaqtda floresan mikroskop turli laboratoriyalar va tasvir platformalarining standart tasvirlash uskunasiga aylandi va kundalik tajribalarimiz uchun yaxshi yordamchidir. Floresan mikroskoplar asosan uch toifaga bo'linadi: tik floresan mikroskoplar (kesish uchun mos), teskari lyuminestsent mikroskoplar (tirik hujayralar uchun mos, kesmani hisobga olgan holda), lyuminestsent stereoskoplar (kattaroq namunalar uchun mos, masalan, o'simliklar, zebra baliqlari (kattalar / embrionlar) ), medaka, sichqoncha / kalamush organlari va boshqalar).
Floresan mikroskopi tasvirlash texnologiyasi keng qo'llaniladi va turlarga boy bo'lib, yangi texnologiyalar hali ham paydo bo'lmoqda. O'zingizning tadqiqotingizni yakunlash uchun texnologiyani tanlashingiz mumkin.
