Floresan mikroskopini aniqlash usuli
floresan mikroskop
Floresan mikroskopiyasi immunofluoresans sitokimyosining asosiy vositasidir. U yorug'lik manbai, filtr plastinka tizimi va optik tizim kabi asosiy komponentlardan iborat. U namunani qo'zg'atish va floresansni chiqarish uchun ma'lum bir to'lqin uzunligidan foydalanadi, bu namunaning floresan tasvirini kuzatish uchun ob'ektiv va okulyar tizim orqali kattalashtiriladi (1-rasm).
(1) yorug'lik manbai
Hozirgi vaqtda yorug'lik manbai sifatida odatda 200 Vt ultra yuqori bosimli simob chiroq ishlatiladi. U kvarts shishasidan yasalgan bo'lib, o'rtasi sharsimon shaklga ega va ichiga ma'lum miqdorda simob to'ldirilgan. Ish paytida ikkita elektrod orasidagi zaryadsizlanish simobning bug'lanishiga olib keladi va shar ichidagi bosim tez o'sib boradi. Simob butunlay bug'langanda, u 50-70 standart atmosfera bosimiga yetishi mumkin, bu odatda 5-15 daqiqa davom etadi. Ultra yuqori bosimli simob lampalarining luminesansligi simob molekulalarini doimiy ravishda ajratib turadigan va kamaytiradigan va fotonlarni chiqaradigan elektrodlar orasidagi zaryadsizlanish natijasidir. U turli floresan moddalarni qo'zg'atish uchun etarli bo'lgan kuchli ultrabinafsha va ko'k binafsha nurlarni chiqaradi, shuning uchun u floresan mikroskoplarda keng qo'llaniladi.
Floresan mikroskopdan foydalanish bo'yicha ehtiyot choralari
(1) Floresan mikroskop zavodining ko'rsatmalariga qat'iy rioya qiling va dasturni o'zboshimchalik bilan o'zgartirmang.
(2) Tekshirish qorong'i xonada o'tkazilishi kerak. Qorong'i xonaga kirganingizdan so'ng quvvatni ulang va o'ta yuqori bosimli simob chiroqni 5-15 daqiqa davomida yoqing. Yorug'lik manbai kuchli yorug'lik chiqaradigan va barqarorlashgandan so'ng, namunani kuzatishni boshlashdan oldin ko'zlar qorong'i xonaga to'liq moslashishi kerak.
(3) Ko'zlarga ultrabinafsha nurlar ta'sirini oldini olish uchun yorug'lik manbasini sozlashda himoya ko'zoynak taqish kerak.
(4) Tekshirish vaqti har safar 1-2 soat bo'lishi kerak. Agar u 90 daqiqadan oshsa, ultra yuqori bosimli simob chiroqning yorug'lik intensivligi asta-sekin kamayadi va floresan zaiflashadi; 3-5 kun davomida ultrabinafsha nurlanish taʼsirida boʻlgan namunalar
Minutdan keyin floresan ham sezilarli darajada kamaydi; Shunday qilib, maksimal davomiylik 2-3 soatdan oshmasligi kerak.
(5) Floresan mikroskop yorug'lik manbasining ishlash muddati cheklangan va vaqtni tejash uchun namunani markazlashtirilgan holda tekshirish kerak.
Vaqtni tejang va yorug'lik manbasini himoya qiling. Havo issiq bo'lsa, issiqlikni tarqatish va sovutish uchun elektr fan qo'shilishi kerak. Yangi lampochkani almashtirishda foydalanish vaqtini boshidan yozib olish kerak. Chiroq o'chirilganda va siz uni qayta ishlatmoqchi bo'lsangiz, lampochkani yoqishdan oldin uning etarlicha sovishini kutishingiz kerak. Kuniga bir necha marta yorug'lik manbasini yoqishdan saqlaning.
(6) Namunani bo'yashdan keyin darhol kuzatib boring, chunki vaqt o'tishi bilan floresan asta-sekin zaiflashadi. Namuna polietilen plastik qopda 4 daraja haroratda saqlansa, u floresansning susayishi vaqtini kechiktirishi va o'rnatish agentining bug'lanishini oldini olishi mumkin.
(7) Floresan yorqinligi uchun hukm mezonlari odatda to'rt darajaga bo'linadi, ya'ni "bir" - yo'q yoki ko'rinadigan zaif floresan. "+" - Faqat ko'rinadigan floresan ko'rinadi. ++- Yorqin floresan bilan koʻrinadi. "+++" - Ko'rinadigan va ko'zni qamashtiruvchi floresan.
