To'qimalar bloklari hajmi bo'yicha biomikroskopiya
Biologik mikroskop Hozirgacha sovuq fiksatsiya, muzlatilgan ultra yupqa kesma va muzlatish quritish to'qima va hujayra rentgen mikroseksiyalari uchun odatiy usullardir. Ushbu usulning tafsilotlari quyidagicha izohlanadi:
Kondensatorli biologik mikroskoplar uchun yorqinlikni o'rtacha qilish uchun kondensatorni yuqoriga va pastga siljitish mumkin va o'zgaruvchan yorug'likning diafragmasini o'rtacha 9b yorqinlikka erishish uchun ham o'zgartirish mumkin. Agar yorug'lik quyoshli bo'lsa, kondensatorni mos ravishda ko'tarish va o'zgaruvchan yorug'lik manbasining diafragmasini mos ravishda kengaytirish mumkin. Agar yorug'lik juda kuchli bo'lsa, kondensator linzalari mos ravishda tushirilishi mumkin va kesishgan yorug'likning diafragmasini mos ravishda kamaytirish mumkin. Agar siz hali ham bu holatda ko'zni qamashtiradigan his qilsangiz, tegishli filtrni tanlashingiz va uni kondanser ostidagi qavsga qo'yishingiz mumkin. Ushbu eman sizni qoniqtiradigan yorqinlikni olishi mumkin. Albatta, kondanserning yuqori va pastki pozitsiyalarini sozlash, o'zgaruvchan optik o'qishning diafragma o'lchamini sozlash va mos filtrni tanlash tajriba orttirish uchun ma'lum bir amaliyot davrini talab qiladi.
Biologik mikroskopiyadagi juda muhim masala shundan iboratki, hujayralarni namuna olish va ajratish jarayonida, muzlatish bilan quritish va qatronlarni qo'yishdan (FD), o'ta yupqa agregatlarni muzlatishdan keyin va muzlatish bilan quritishdan so'ng, har bir qismda 65 ta element mavjud. ehtiyotkorlik bilan ishlov berish kerak. Tahlil qilinadigan hujayralar zarar etkaza olmaydi. Chunki rentgen mikroanalizi nafaqat ko'p bosqichlarni o'z ichiga oladi, balki juda ko'p xarajatlarni ham talab qiladi. Agar tahlil qilingan hujayralar uzoq vaqt va ko'p bosqichli ishlov berishdan so'ng zararlangan hujayralar yoki o'lik hujayralar bo'lsa, noto'g'ri xulosalar chiqarish juda afsuslanadi. Masalan, kollagenaza bilan davolash bilan ajratilgan kardiomiotsitlar ikkita shaklga ega, biri uzun tayoq
Biomikroskopiya Bu ikki turdagi hujayralardagi elektrolitlar miqdori va taqsimoti butunlay boshqacha. Dumaloq kardiomiotsitlarda Na juda yuqori, K esa juda past, nematodalarda ca kontsentratsiyasi juda yuqori. Boshqa tahlil usullari bilan tekshirilgandan so'ng, dumaloq hujayralardagi yuqori Na va past K, mitoxondriyadagi yuqori Ca ning hujayralarni ajratish jarayonida hujayra membranasining shikastlanishi bilan bog'liqligi isbotlangan. Hujayralar va to'qimalarni muzdek sovuq fiksatsiya qilish usuli odatda birinchi navbatda söndürme va fiksatsiyani qabul qilish va keyin ularni suyuq azotda saqlashdir. Saqlash ta'siri uchun söndürme fiksatsiyasi juda muhimdir. Tirik hujayralar yoki yangi to'qimalar suvga boy. Söndürme paytida ezilgan sovutgich bilan bevosita aloqada bo'lgan hujayralar yoki to'qimalarning qismlari (ayniqsa, suyuq azot bilan o'chirilganda) ko'pincha muzlatiladi va birinchi bo'lib mahkamlanadi, shu bilan "qobiq" hosil bo'ladi, bu esa hujayralarning markaziy qismlariga to'sqinlik qiladi. maydalangan va sovuqda mahkamlangan. Shuning uchun, X-chiziq mikro-hududini tahlil qilganda, ko'pincha katta hujayralar markazida muz kristallari borligi aniqlanadi. Buni oldini olish uchun erish nuqtasi suyuq azotnikidan yuqori, lekin 806c dan past bo'lgan modda buzilgan sovutgich sifatida ishlatiladi. Bunday moddalar juda ko'p, lekin olish eng oson, eng arzoni konsentrlangan propan (qaynoq harorati - 42.120c, erish nuqtasi - 187.10c, molekulyar og'irligi 44.1), sovutish tezligi esa eng tezdir. . Ammo uning kamchiligi yonuvchanligidir.
Biologik mikroskop mushak tolasini maxsus tokchaga qo'yishi mumkin, shunda mushak tolasining qisqarishi ma'lum bir fazaga yetganda va uni tuzatish kerak bo'lganda, mushak tolasiga suyuqlik propanni purkash uchun nozulni darhol ishga tushiring va uni mahkamlang. Keyin mushak tolalari ramka bilan birga chiqarilib, suyuq azotga solingan. Agar qon hujayralari yoki ajratilgan hujayralar mahkamlansa, avval hujayralarni past tezlikda santrifüjlash orqali konsentratsiyalang, hujayralarni yaxshi issiqlik o'tkazuvchanligi bo'lgan kumush flakonga o'tkazing, flakonni suyuq propanga joylashtiring va mahkamlash uchun muzlatib qo'ying. Hall laboratoriyasida kalamush oshqozon osti bezini mahkamlashda ikkita po'lat blok suyuq geliy (yoki suyuq azot) bilan oldindan sovutilgan va ikkita mis bloklar forseps bilan qisilgan va o'chirish va tuzatish uchun oshqozon osti bezining old va orqa tomoniga joylashtirilgan. oshqozon osti bezi. To'qimalar yoki hujayralar o'chirish va mahkamlashdan keyin uzoq muddatli saqlash uchun suyuq azotda saqlanishi mumkin.
Biologik mikroskop Hozirgi vaqtda eng mashhur muzlatilgan ultra yupqa kesma usulidan tashqari, olimlar tomonidan qo'llaniladigan yana bir cho'ktirish usuli mavjud. Tahlil qilishdan oldin uni harakatsizlantirish uchun tahlil qilinadigan komponent bilan cho'kindi hosil qilish uchun modda qo'shiladi va keyin cho'kindi tahlil qilinadi. Masalan, odamlar ko'pincha mushak hujayralarida kaliyni to'plash uchun oksalat va piroantimonatdan foydalanadilar. Birinchisi sitoplazmadagi Ca ning past konsentratsiyasiga etarlicha sezgir emas; piroantimonat sezgirroq va miyada erkin Ca bilan elektron zich konlarni hosil qilishi mumkin, ammo piroantimonat natriy, marganets, bariy, temir bilan mos kelmaydi Konlar ham hosil bo'ladi va kamroq o'ziga xosdir. Namunani tayyorlash jarayoni oddiy transmissiya elektron mikroskopining ultra yupqa kesma namunalarini tayyorlashga o'xshaydi, farq shundaki, fiksatsiyadan oldin 3 foiz kaliy piroantimonat (fosfat tampon tuzi, pH 7,6) fiksatsiyadan oldin 6 soat davomida mahkamlangan va bo'yalgan mushakning ultra yupqa qismlarida, Har bir sarkomerning A va 2-bandlarining o'rta chizig'ida qora qatlamlar ko'rindi va bo'yalmagan qismlar rentgen mikrotahlil uchun ishlatilgan. Diaminobenzidin tetrahidroklorid (DAB) gem o'z ichiga olgan moddalarni va boshqalarni cho'ktirish uchun ishlatilgan. Gistokimyoviy yog'ingarchilik reaktsiyasi va rentgen mikro-differentsiatsiya ko'prigining kombinatsiyasi muzlatilgan ultra yupqa kesim sharoitlari bo'lmagan laboratoriyalarda ko'rib chiqilishi mumkin. Yarim miqdoriy tahlil qilinadigan elementlarning eng yuqori balandligiga qarab amalga oshirilishi mumkin
